質粒載體的基本介紹

質粒是小型環狀DNA分子，在基因工程中作為最常用，最簡單的載體，必須包括三部分：遺傳標記基因，復制區，目的基因。 質粒在所有的細菌類群中都可發現，它們是獨立于細菌染色體外自我復制的DNA分子。

自然界中，質粒是在營養充足時出現的，它在結構、大小、復制方式，每個細菌的拷貝數，在不同的細菌體內的繁殖力不同，在菌種之間的轉移力等方面都會變化，可能最重要的是質粒所攜帶的特征的改變。大多數原核生物的質粒是雙鏈環狀的DNA分子；但是無論是在革蘭氏陽性還是陰性菌體內都可以發現線狀質粒。質粒大小變化很大，可從幾個到數百個kb。

質粒依靠宿主細胞提供的蛋白質進行復制，但也可以使宿主細胞獲得質粒編碼的功能。質粒復制可以與細菌的細胞周期同步，導致菌體內質粒的拷貝數較低，質粒復制也可獨立于細胞周期，使每個菌體內擴增了成百上千個質粒拷貝。一些質粒在菌種間可自由地轉移它們的DNA分子，另一些只轉移質粒給同種細菌，而有些卻根本不轉移它們的DNA。

質粒帶有具有許多功能的基因，這些功能包括對抗生素和重金屬的抗性、對誘變原的敏感性、對噬菌體的易感或抗性、產生限制酶、產生稀有的氨基酸和毒素、決定毒力、降解復雜有機分子，以及形成共生關系的能力和在生物界內轉移DNA的能力。

質粒載體具備的條件

質粒載體絕大多數是以天然質粒為基礎,加以人工改造和組建。理想的細菌質粒載體,除去其他類型載體相同的特點外,還應具備以下條件：

①相對分子質量盡可能小,質粒越小,拷貝數越高,而且便于提取和純化；

②DNA結構和功能清楚,質粒序列中具有包含一系列單一限制酶酶切位點的多克隆位點,便于帶有不同末端的外源片段的插入；

③具有在宿主中合適的一個或多個選擇標記,用以篩選攜帶有目的片段的克隆,這類選擇標記可以分為顯性標記和營養缺陷型標記,最主要的顯性標記是各種抗生素抗性基因(如氨芐青霉素抗性基因、四環素抗性基因、阿泊拉霉素抗性基因、氯霉素抗性基因等)；

④缺失流動基因,這樣質粒就不會從一個細菌接觸轉移到另一個細菌。

常用的質粒載體

載體種類：質粒、噬菌體、腺病毒載體、逆轉錄病毒載體

質粒特點：

存在于細菌染色體外的小型環狀DNA分子。

具有自我復制功能。

帶有抗性基因及表型識別等遺傳性標記物。

經改造后具有多克隆位點。

舉例：pMD-18T質粒、pUCl9質粒、pBR322質粒等