甘油菌種復蘇保存涉及幾個關鍵步驟，?包括菌種的保存、?復蘇以及再次保存的過程。?以下是詳細的步驟和注意事項：?

菌種保存：?

將菌種接種于LB液體培養基，?并在對數生長期時，?當培養體系內渾濁可見時，?進行保存。?

準備50%濃度的甘油溶液，?可以通過等體積的蒸餾水和甘油混合得到。?

在無菌條件下，?將菌液與50%濃度的甘油按1:1的比例混合，?使甘油終濃度達到25%。?

將混合液轉移至2ml離心管中，?并在-20°C冰箱內保存。?這種條件下，?菌種的保存有效期為1年。?若需長期保存，?建議在-70°C或-80°C下凍存，?保藏時間一般為2-4年左右12。?

菌種復蘇：?

在使用前，?將保存的菌種在30°C水浴中解凍。?

解凍后，?將菌液接種到固體培養基上，?并在適宜條件下培養24-48小時，?以恢復菌種的活性。?

再次保存：?

復蘇后的菌種可以在新的液體培養基中繼續培養，?并再次進行甘油保存。?這一過程確保了菌種的長期保存和可用性。?

注意事項：?

確保所有使用的工具和容器都經過適當的滅菌處理，?以避免污染。?

在操作過程中保持無菌條件，?以防止外界微生物的污染。?

正確的保存和復蘇方法對于保持菌種的活性和純度至關重要。?

保存的溫度對菌種的長期存活有很大影響，?低溫條件有利于延長保存時間。