特殊染色技術的應用

現代病理學中免疫組織化學技術、電子顯微鏡技術以及其它細胞及分子生物學技術應用日益廣泛， 這些技術要求一定的實驗條件和試劑，如市面上使用廣泛的徠卡染色機及其配套的徠卡透明試劑。相對而言，組織化學技術則具有無需復雜的實驗條件和試劑、操作又比較簡單的優勢，在臨床病理學診斷中具有重要的應用價值。

組織化學染色的方法很多，這里僅介紹幾種常用的組織化學染色在病理診斷中的應用。

一、膠原纖維的染色

凡是間葉組織細胞都可產生網織纖維，也可產生膠原纖維，纖維母細胞是產生膠原纖維的主要細胞。膠原纖維是結締組織中的主要纖維，是結締組織中起支持作用的重要部分，具有一定的韌性和堅固性，能抵抗一定的牽引力而不致撕裂。膠原纖維是原膠原互相錯開1/4平行排列交聯成膠原原纖維，膠原原纖維再聚合成較寬的結構。按膠原的化學成分可分為15種，間質中的膠原纖維主要由I、Ⅱ、Ⅲ型膠原組成，新鮮時呈白色，故又稱為白纖維。在HE染色中呈均一的粉紅色，與周圍間質區分不是很清楚。用染色液進行染色后，便可明顯區別開來，易于觀察病變時膠原纖維的變化。

應用：

(1)器官硬化性疾病的觀察：如肝硬變、心肌瘢痕的觀察，膠原染色更易于觀察診斷。

(2)瘢痕與淀粉樣物質鑒別：前者膠原纖維染色為陽性，后者為陰性。

(3)骨纖維異常增殖病與骨纖維化的鑒別：利用膠原纖維染色可較易觀察前者膠原纖維紊亂，縱橫交錯，后者較規則。

二、彈力纖維染色

彈力纖維是結締組織發生形成較晚的一種纖維，在創傷修復中一般在4——5周才有較明顯的彈力纖維形成。彈力纖維艱固、較小而彈性較大，容易伸展，在結締組織起彈性作用。彈力纖維由彈性蛋白組成，新鮮時呈黃色又稱黃纖維。彈力纖維纖維分枝連成網，折光性強，含量多時在HE染片上呈折光性強的粉紅色，量少的不顯色。故量多時與膠原纖維不易區別，量少則不能觀察。彈力纖維染色主要用于觀察彈力纖維有無增生、腫脹、斷裂、破碎及萎縮或缺如等病變。
  應用：

(1）動靜脈的辨認：在血管病變時是動脈還是靜脈以及是否為血管壁難辨認時，彈力纖維染色有助于辨認。有彈力板者為動脈，有彈力纖維構成血管輪廓者為血管。彈力纖維抗損傷能力較強，故彈力性纖維構成血管輪廓不易損壞。

（2）心血管先天性彈力組織增生，這組疾病有先天性內膜炎及冠狀動脈的彈力纖維組織增生。彈力纖維染色有助于診斷。

（3）彈力纖維損傷性疾?。哼@組疾病有肺氣腫、動脈粥樣硬化、大動脈中層炎癥等，彈力纖維染色有助于這些疾病的觀察診斷。

（4）一些與彈力纖維變化有關的皮膚疾病的診斷與鑒別診斷：這組疾病有皮膚松馳癥，萎縮性硬化性苔蘚等，其診斷與鑒別診斷常依賴于彈力纖維染色，以觀察彈力纖維變化。

三、色素染色（含鐵血黃素及黑色素）

含鐵血黃素是由漏出于血管外的紅細胞，被巨噬細胞吞噬后，分解血紅蛋白產生的顆粒，HE染色為棕黃色，故稱為含鐵血黃素。因有時與福爾馬林沉渣及黑色素等難相區別，故做含鐵血黃素染色。

應用：

主要用于同其它色素鑒別，若為陽性，顯示陳舊性出血。

黑色素常見于皮膚色素細胞，惡性黑色素瘤?？僧a生黑色素。組織內大量存在時呈棕黑色，易于鑒別。但少量存在時便難與其它色素相鑒別，須作黑色素染色。

應用：

（1）黑色素瘤的診斷與鑒別診斷：腫瘤細胞內色素是否為黑色素，染黑色素有助于確定黑色素性質及腫瘤的定性診斷。

（2）血色病與黑便?。赫嫫扔猩爻林?，黑色素陰性而含鐵血黃素陽性者可能為前者。

特殊染色的基本信息

為了顯示與確定組織或細胞中的正常結構或病理過程中出現的異常物質、病變及病原體等，需要分別選用相應的顯示這些成分的染色方法進行染色。包括：膠原纖維染色（Masson等）、網狀纖維染色、彈力纖維染色、肌肉組織染色（磷鎢酸蘇木素）、脂肪染色（蘇丹III）、糖原染色（PAS）、粘液染色（PAS）等。

Masson三色染色：膠原纖維藍色（苯胺藍復染）或綠色（亮綠復染），肌纖維、纖維素紅色，紅細胞呈橘紅色。

特殊染色的注意事項

1、染色前：

①切出的石蠟切片要好，不能有皺褶或者刀痕，切片不能太厚。

②撈片時，最好一張玻片撈一個組織，組織最好位于玻片的中間，美觀的同時也利于脫蠟（有時二甲苯的液面低于組織片的時候，達不到脫蠟的目的）。

③石蠟切片脫蠟到水時，一定要注意組織切片脫蠟務必要徹底（脫蠟時間不能太少）以使脫蠟后的組織達到真正的“干凈”。否則剩余的未脫干凈的石蠟粘附在組織表面，在染色時染色液未能充分與組織接觸，最終導致染色效果不佳，甚至染不上顏色。

④在染色過程中最好不要在玻片上貼標簽紙，以避免脫蠟時把標簽紙也浸沒，致使標簽紙上的膠黏到玻片上，造成染色不佳。

⑤在染色前，用有色鉛筆在組織周圍劃一個圈，這樣在滴加染液時就不會使染液溢出。

2、染色時：

①染色時必須嚴格按照染色操作說明書進行染色。

②在染色過程中，前一個染液浸染完成后，在進行下一個染液的步驟之前，必須徹底充分水洗，使前一個染液沖洗干凈后再進行下一步驟。

③ 每次滴加染液前，務必吸干組織上多余的水分，避免多余的水把染液稀釋了，造成染色不佳。

④在滴加染液時，務必使染液完全覆蓋組織，但不能溢出圈外，避免浪費試劑。