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提取質粒DNA的質量和含量的鑒定方法

2024-10-11 9:45 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑

瓊脂糖凝膠電泳鑒定質粒DNA

瓊脂糖凝膠電泳是分離鑒定和純化DNA片段的常用方法。DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應和分子篩效應,DNA分子在高于等電點的pH溶液中帶負電荷,在電場中向正極移動。

由于糖磷酸骨架在結構上的重復性質,相同數量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷,因此它們能以同樣的速度向正極方向移動。
不同濃度瓊脂糖凝膠可以分離從200bp至50kb的DNA片段。在瓊脂糖溶液中加入低濃度的溴化乙錠(ethidum bromide ,EB),在紫外光下可以檢出 10ng的DNA條帶,在電場中,pH8.0條件下,凝膠中帶負電荷的DNA向陽極遷移。

質粒DNA提取方法
1,堿裂解法
2,煮沸裂解
3,羥基磷灰石柱層析法
4,質粒DNA釋放法
5,酸酚法等。

選擇哪一種方法取決于以下幾個因素
1,質粒的大小
2,大腸桿菌菌株
3,裂解后用于純化的技術和實驗要求

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