常見的BCA法檢測蛋白定量實驗步驟
2025-03-07 9:38 來源：上海遠慕生物試劑
BCA（Bicinchoninic Acid）法是一種常用的蛋白定量檢測方法，其原理是利用蛋白質與銅離子在堿性溶液中發生絡合反應，生成穩定的紫紅色復合物，再與標準曲線比較，即可求出待測蛋白的濃度。該方法具有靈敏度高、準確度高、操作簡便、抗干擾能力強等優點，廣泛應用于生物化學等領域。
一、簡介
BCA（Bicinchoninic Acid）法是一種常用的蛋白定量檢測方法，其原理是利用蛋白質與銅離子在堿性溶液中發生絡合反應，生成穩定的紫紅色復合物，再與標準曲線比較，即可求出待測蛋白的濃度。該方法具有靈敏度高、準確度高、操作簡便、抗干擾能力強等優點，廣泛應用于生物化學等領域。
二、實驗步驟
1.試劑準備
（1）BCA工作液：將BCA試劑A和B按50:1的比例混合，充分搖勻，備用。
（2）標準蛋白溶液：取適量的標準蛋白，用PBS或去離子水溶解，配制成濃度為1mg/mL的標準蛋白溶液。
2.蛋白樣品制備
（1）細胞裂解：將細胞樣品離心，去除上清液，加入適量的細胞裂解液，在冰上裂解30min，使細胞充分裂解。
（2）去除雜質：將裂解后的樣品離心，去除沉淀，保留上清液。在上清液中加入適量的SDS，使終濃度為0.1%，充分混勻。
（3）標準曲線制備：取適量的標準蛋白溶液，加入適量的SDS，使終濃度為0.1%，然后分別稀釋成不同濃度的標準蛋白溶液。取96孔板，分別加入不同濃度的標準蛋白溶液，每個濃度設3個復孔。在每個孔中加入BCA工作液，充分混勻。然后按照說明書要求，在特定波長下測量吸光度值，繪制標準曲線。
3.蛋白定量檢測
（1）取適量的待測蛋白樣品，加入適量的SDS，使終濃度為0.1%，充分混勻。然后按照標準曲線的制備方法，加入BCA工作液，測量吸光度值。
（2）根據標準曲線，查找出待測蛋白樣品的濃度。如果待測蛋白樣品濃度較高，可以進行適當稀釋后再進行測定。
三、注意事項
1.BCA工作液應儲存于4℃避光保存，避免反復凍融。
2.實驗過程中應保持樣品和標準蛋白溶液的pH值一致，以保證結果的準確性。
3.在實驗過程中應避免交叉污染，以免影響實驗結果。
4.對于一些特殊的蛋白質樣品，可能需要采用其他方法進行定量檢測。
![雙[三(羥甲基)氨基甲烷],CAS:6976-37-0](http://struc.chem960.com/strucimg/7000/ctzw0nzi34oyob9fnlmhiwee.png)
