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【細(xì)胞融合技術(shù)】以人鼠細(xì)胞雜交為例說明

2025-03-21 10:23 來源:上海遠(yuǎn)慕生物試劑
開始,融合的細(xì)胞一半是紅色,一半是綠色。在37℃下40分鐘后,兩種顏色的熒光在融合的雜種細(xì)胞表面呈均勻分布,這說明抗原蛋白在膜平面內(nèi)經(jīng)擴(kuò)散運(yùn)動(dòng)而重新分布。這種過程不需要ATP。如果將對(duì)照實(shí)驗(yàn)的融合細(xì)胞置于低溫(1℃)下培育,則抗原蛋白基本停止運(yùn)動(dòng)。這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果令人信服地證明了膜整合蛋白的側(cè)向擴(kuò)散運(yùn)動(dòng)。
人、鼠細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)分三步進(jìn)行∶

首先用熒光染料標(biāo)記抗體∶

將小鼠的抗體與發(fā)綠色熒光的熒光素(fluorescin)結(jié)合,人的抗體與發(fā)紅色熒光的羅丹明(rhodamine)結(jié)合;

第二步是將小鼠細(xì)胞和人細(xì)胞在滅活的仙臺(tái)病毒的誘導(dǎo)下進(jìn)行融合;

最后一步將標(biāo)記的抗體加入到融合的人、鼠細(xì)胞中,讓這些標(biāo)記抗體同融合細(xì)胞膜上相應(yīng)的抗原結(jié)合。

開始,融合的細(xì)胞一半是紅色,一半是綠色。在37℃下40分鐘后,兩種顏色的熒光在融合的雜種細(xì)胞表面呈均勻分布,這說明抗原蛋白在膜平面內(nèi)經(jīng)擴(kuò)散運(yùn)動(dòng)而重新分布。這種過程不需要ATP。如果將對(duì)照實(shí)驗(yàn)的融合細(xì)胞置于低溫(1℃)下培育,則抗原蛋白基本停止運(yùn)動(dòng)。這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果令人信服地證明了膜整合蛋白的側(cè)向擴(kuò)散運(yùn)動(dòng)。

細(xì)胞融合關(guān)鍵

1.技術(shù)上的誤差常常導(dǎo)致融合的失敗。例如,供者淋巴細(xì)胞沒有查到免疫應(yīng)答。這必然要失敗的。

2.融合試驗(yàn)最大的失敗原因是污染,融合成功的關(guān)鍵是提供一個(gè)無毒無菌的操作環(huán)境。
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