菌落總數(shù)平板計(jì)數(shù)原則：

1、無菌操作：操作中必須有“無菌操作”的概念，所用玻璃器皿必須是完全滅菌的，不得殘留有細(xì)菌或抑菌物質(zhì)。所用剪刀、鑷子等器具也必須進(jìn)行消毒處理。樣品如果有包裝，應(yīng)用75%乙醇在包裝開口處擦拭后取樣。

操作應(yīng)當(dāng)在超凈工作臺(tái)或經(jīng)過消毒處理的無菌室進(jìn)行。瓊脂平板在工作臺(tái)暴露15分鐘，每個(gè)平板不得超過15個(gè)菌落。

2、采樣的代表性：如系固體樣品，取樣時(shí)不應(yīng)集中一點(diǎn)，宜多采幾個(gè)部位。固體樣品必須經(jīng)過均質(zhì)或研磨，液體樣品須經(jīng)過振搖，以獲得均勻稀釋液。

3、樣品稀釋誤差：為減少樣品稀釋誤差，在連續(xù)遞次稀釋時(shí)，每一稀釋液應(yīng)充分振搖，使其均勻，同時(shí)每一稀釋度應(yīng)更換一支吸管。

在進(jìn)行連續(xù)稀釋時(shí)，應(yīng)將吸管內(nèi)液體沿管壁流入，勿使吸管尖端伸入稀釋液內(nèi)，以免吸管外部粘附的檢液溶于其內(nèi)。

為減少稀釋誤差，SN標(biāo)準(zhǔn)采用取10mL稀釋液，注入90mL緩沖液中。

菌落平板計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性關(guān)鍵

一、平板劃線分離法由接種環(huán)以菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進(jìn)行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續(xù)劃線，微生物細(xì)胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少，并逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經(jīng)培養(yǎng)后，可在平板表面得到單菌落。

二、稀釋倒平板法先將待分離的材料用無菌水作一系列的稀釋（如一∶一0、一∶一00、一∶一000、一∶一0000…），然后分別取不同稀釋液少許，與已溶化并冷卻至四5℃左右的瓊脂培養(yǎng)基混合，搖勻后，傾入滅過菌的培養(yǎng)皿中，待瓊脂凝固后，制成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養(yǎng)一定時(shí)間即可出出菌落。如果稀釋得當(dāng)，在平板表面或瓊脂培養(yǎng)基中就可出現(xiàn)分散的單個(gè)菌落，這個(gè)菌落可能就是由一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞繁殖形成的。隨后挑取該單個(gè)菌落，或重復(fù)以上操作數(shù)次，便可得到純培養(yǎng)。

稀釋涂布法：優(yōu)點(diǎn)：可以計(jì)數(shù)，可以觀察菌落特征。缺點(diǎn)：吸收量較少，較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延。一般用于平板培養(yǎng)基的回收率計(jì)數(shù)！！

稀釋混合平板法：優(yōu)點(diǎn)：可以計(jì)數(shù)，吸收量為一ml，較方便。優(yōu)點(diǎn)：不能觀察菌落特征。一般用于菌落總數(shù)的計(jì)數(shù)！！平板劃線法：優(yōu)點(diǎn)：可以觀察菌落特征，對(duì)混合菌進(jìn)行分離！！缺點(diǎn)：不能計(jì)