在細胞機制的科學研究中,我們肯定會離不開細胞培養,細胞培養中的細胞傳代是非常重要的程序,這一環節不注意,細胞的生長狀態不好,會嚴重影響細胞實驗進程。所以今天小編就帶大家一起去學習正確進行細胞傳代,希望我的經驗給大家帶來幫助。
適應在體外培養條件下持續傳代培養的細胞稱為傳代細胞。幼年動物的腎、肺、肝、卵巢、上皮、肌肉與腫瘤等組織的細胞較易培養,而神經細胞則較難培養。原代細胞基礎上通過胰酶等物質消化后繼續用于細胞培養的細胞,它與原代細胞具有相同核型。這類細胞在體外可以無限制分裂.下面小編就講一下細胞傳代的方法以及步驟:
1.【無菌環境】
在細胞實驗之前要注意無菌環境的建立,紫外殺毒滅菌,酒精消毒都是十分有必要的。
2.【鏡下檢查】
鏡下檢查結果非常重要,鏡檢的結果非常重要,要根據你自己的觀察進行細胞密度的識別,從而進行細胞傳代比例的確定,進行更好的細胞數量的控制,如果實驗要求比較高,需要細胞計數板計數。
3.【過火焰】
記住,所有開瓶的東西都要進行過酒精燈外焰,瞬間高溫進行灰塵的固定。這樣會大大減少染菌幾率。
4.【移液工具】
很多人對于移液工具都有偏好,不好說什么就是正確的。但是從無菌角度。使用移液管比微量移液槍減少污染的幾率要高。希望大家能用移液管。
5.【交叉污染】
混勻細胞懸液和移取培養基以及血清的工具要分開;還有就是胰酶和血清也要嚴格分開,否則容易造成交叉感染,使細胞增加染菌幾率。
6.【消化時間】
對于貼壁細胞,我想要大家注意的是胰酶消化時間,對于常用0.25%的胰酶最好把消化時間控制在30s內,必要是最好鏡檢看一下是否脫壁。但是這是一個經驗活,要多積累經驗。
7.【細胞混勻】
細胞的混勻要輕柔,氣泡的產生對細胞的狀態是有影響的,希望大家注意。另外,貼壁細胞容易粘連,所以要多吹打幾次。