表 1. 直接法與間接法的比較 直接檢測法中，標記物通過共價鍵直接連接到一抗上。而對于間接檢測法，標記物則是共價連接到與一抗特異性結合的二抗上。間接法檢測包括兩步：第一步，用未標記的一抗進行孵育，抗體與抗原結合（若存在抗原），洗去未結合的抗體（一般 3～5 次），第二步則是加入標記二抗孵育（通常 1 小時），洗滌去掉未結合的二抗，然后量化結合在一抗上的標記物。在直接法中，標記物直接與一抗共價結合，因此僅需與含有抗原的樣本孵育這一步驟，而且只需一次洗滌，而間接法則需要兩輪孵育與洗滌步驟。直接法簡化了試驗的流程，降低了試驗的變異性，增加了數據的可靠性。然而一抗的共價修飾可以導致抗體親和力的改變，這種情況的出現與標記二抗帶來的非特異性結合的問題相比而言，顯得無關緊要。下表列舉出了直接法與間接法的主要優缺點比較。