生化領域常用的幾種緩沖溶液及配制方法

2019-01-07 10:07 作者：洛辰來源：上海遠慕生物試劑

緩沖溶液一般是由溶度較大的弱堿（或弱酸）及其共軛酸（或共軛堿）組成，可通過弱酸解離平衡的移動達到消耗掉外來少量強酸、強堿，或對抗稍加稀釋的作用，使溶液pH值不發生明顯的變化，在科研工作、工業生產以及一切生命過程中，都是非常重要的。本文將對生化實驗中常用的緩沖溶液及配制方法進行簡單的介紹。

PB和PBS緩沖溶液

PB和PBS是生化實驗中最為常用的緩沖液，0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液（PB）常用于配制固定液、蔗糖等；0.01mol/L的磷酸鹽緩沖生理鹽水（PBS）主要用于漂洗組織標本、稀釋血清等，其pH應在7.25～7.35之間。

1．磷酸鹽緩沖液（Phosphate Buffer, PB）

配制時，常先配制0.2mol/L的 NaH₂PO₄和0.2mol/L的Na₂HPO₄，兩者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液（PB），根據需要可配制不同濃度的PB（見表1）。

2．磷酸鹽緩沖生理鹽水（Phosphate Buffered Saline, PBS）

稱取NaCl 8.5～9g及0.2mol/L的PB 50mL，加入1000mL的容量瓶中，最后加重蒸水至1000mL，充分搖勻即可得到0.01mol/L的PBS。一般情況下，0.2mol/L PB的pH值稍高些，稀釋成0.01mol/L的PBS時，?？蛇_到要求的pH值，如果需要調整，通常通過調整PB的pH來實現。

表1. 0.2mol/L磷酸鹽緩沖液（pH5.7～8.0）

pH	0.2mol/L NaH₂PO₄(mL)	0.2mol/L Na₂HPO₄(mL)
5.7	93.5	6.5
5.8	92.0	8.0
5.9	90.0	10.0
6.0	87.7	12.3
6.1	85.0	15.0
6.2	81.5	18.5
6.3	77.5	22.5
6.4	73.5	26.5
6.5	68.5	31.5
6.6	62.5	37.5
6.7	56.5	43.5
6.8	51.0	49.0
6.9	45.0	55.0
7.0	39.0	61.0
7.1	33.0	67.0
7.2	28.0	72.0
7.3	23.0	77.0
7.4	19.0	81.0
7.5	16.0	84.0
7.6	13.0	87.0
7.7	10.5	89.5
7.8	8.5	91.5
7.9	7.0	93.0
8.0	5.3	94.7

Tris緩沖溶液

Tris緩沖液除被廣泛用作核酸和蛋白質的溶劑外，還被用于不同pH條件下的蛋白質晶體生長和線蟲核纖層蛋白中間纖維的形成，同時也是蛋白質電泳緩沖液的主要成分之一。

1. Tris-HCl緩沖液

生化實驗中常用的Tris-HCl緩沖液濃度為0.05mol/L，pH=7.6，主要用于配制Tris緩沖生理鹽水（TBS）、DAB顯色液。配制時，先以少量重蒸水（300～500mL）溶解60.57g Tris，加入HCl后，用1N的HCl或1N的NaOH將pH調至7.6，最后加重蒸水至1000mL，得儲備液，于4℃冰箱中保存。用時取儲備液稀釋10倍即可（見表2）。

表2. 0.05mol/L Tris-HCl緩沖液（pH7.19～9.10）

pH	0.2mol/L Tris(mL)	0.2mol/L HCl(mL)	H₂O
7.19	10.0	18.0	12.0
7.36	10.0	17.0	13.0
7.54	10.0	16.0	14.0
7.66	10.0	15.0	15.0
7.77	10.0	14.0	16.0
7.87	10.0	13.0	17.0
7.96	10.0	12.0	18.0
8.05	10.0	11.0	19.0
8.14	10.0	10.0	20.0
8.23	10.0	9.0	21.0
8.32	10.0	8.0	22.0
8.41	10.0	7.0	23.0
8.51	10.0	6.0	24.0
8.62	10.0	5.0	25.0
8.74	10.0	4.0	26.0
8.92	10.0	3.0	27.0
9.10	10.0	2.0	28.0

2. Tris緩沖生理鹽水（Tris Buffered Saline，TBS）

TBS主要用于漂洗標本，常用于免疫酶技術中。先以重蒸水少許溶解3.5～9g NaCl，再加0.5mol/L Tris-HCl緩沖液 100mL，最后加重蒸水至1000mL，充分搖勻使Tris終濃度為0.05mol/L。

3. Tris-TBS (PBS)

常用濃度為1%和0.3%，1%Tris-TBS主要用于漂洗標本，3%Tris-TBS主要用于稀釋血清。先以重蒸水少許溶解8.5～9g NaCl后，加入10mL (1%)或3mL (0.3%) Triton X-100及0.5mol/L Tris緩沖液1000mL(50mL)或（0.2mol/L的PB），最后加重蒸水至1000mL，充分搖勻。

二甲胂酸緩沖液

先稱取二甲胂酸鈉（MW：214）42.8g，加蒸餾水至1000mL，獲得0.2mol/L的二甲胂酸鈉溶液；再取HCl 1.7mL加蒸餾水至1000mL ,配成0.1N，最后取0.2mol/L二甲胂酸鈉溶液500mL及0.1N HCl 28mL混合，加蒸餾水至1000mL，即為0.1mol/L的二甲胂酸鈉緩沖液。不同pH值的配制方法見表3。

表3. 0.1mol/L二甲胂酸鈉緩沖液（pH5.0～7.4）

pH	0.2mol/L二甲胂酸鈉（mL）	0.2N HCl(mL)	蒸餾水
5.0	25	23.5	51.5
5.2	25	22.5	52.5
5.4	25	21.5	53.5
5.6	25	19.6	55.5
5.8	25	17.4	57.5
6.0	25	14.8	60.3
6.2	25	11.9	63.1
6.4	25	9.2	65.8
6.6	25	6.7	68.3
6.8	25	4.7	70.3
7.0	25	3.2	71.8
7.2	25	2.1	72.9
7.4	25	1.4	72.9

HEPES緩沖溶液

HEPES是一種非離子兩性緩沖液，其在pH 7.2~7.4 范圍內具有較好的緩沖能力，常用在生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里，其最大優點是在開放式培養或細胞觀察時能維持較恒定的PH值，并對細胞無毒性作用。使用終濃度為10~50mmol/L。關于HEPES 緩沖溶液的配制，根據用途，有以下幾種方法：

（1）119.15 g HEPES 溶解在400mL蒸餾水中，加0.5~1M 的NaOH水溶液調節至少所需pH，然后用蒸餾水定容至500mL，得1 M HEPES, pH = 7.0，于4°C保存；
（2） HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na₂HPO₄·7H₂O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液調節pH值，最后定容；
（3）將1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na₂HPO₄·2H₂O、0.2g葡聚糖和1g HEPES溶解在90mL的蒸餾水，用0.5M NaOH調節至所需pH值，再用蒸餾水定容至100mL即可。

MOPS

MOPS Buffer，即3-嗎啉丙磺酸緩沖液，屬于生物緩沖劑，可作為二維凝膠電泳中等電聚焦電泳（IEF）的電解質系統成分；還可應用于Northern雜交，作為RNA的分離和轉膜時的緩沖液。常用的10×MOPS Buffer配制方法如下：

（1）稱量41.8 g MOPS，溶解于約700mL DEPC處理水中；
（2）使用2 N NaOH 調節pH值至7.0；
（3）向溶液中加入DEPC處理的1M NaOAC 20mL、0.5M EDTA(pH8.0) 20mL；
（4）定容至1 L，用0.45 μm 濾膜過濾除去雜質，室溫避光保存。

緩沖溶液在科研、醫學、工農業中都有及其廣泛的應用，研究工作的溶液體系pH值的變化往往會直接影響到研究工作的成效。在選擇和配制緩沖溶液時，要(1)選擇合適的緩沖系，確定pH位于緩沖范圍內，并且不干擾主反應；(2)有較好的緩沖能力，使緩沖體系有較大的緩沖容量；(3)濃度合適：總濃度過低，緩沖容量過小，總濃度過高，滲透壓過大。配制出合適的緩沖溶液，才能夠達到預期的實驗目的。

3d欧美精品动漫xxxx无尽_岛国精品视频在线播放_亚洲一级网站_日韩免费精品视频

產品分類

促銷產品

生化領域常用的幾種緩沖溶液及配制方法