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常用的電泳緩沖液有哪些,如何配制

2019-12-24 15:20 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
電泳緩沖液是核酸、蛋白質(zhì)凝膠電泳系統(tǒng)的一個重要組成,是電泳場中的導體,也是維持電泳系統(tǒng)恒定 pH值的必要條件。它是指在進行分子電泳時所使用的緩沖溶液,用以穩(wěn)定體系酸堿度。常見的核酸電泳緩沖液有:TAE、TBE、TPE和MOPS等。
 
電泳緩沖液的作用
緩沖液在電泳過程中的一個作用是維持合適的pH。電泳時陽極與陰極都會發(fā)生電解反應,陽極發(fā)生的是氧化反應(4OH--4e->2H2O+O2),陰極發(fā)生的是還原反應(4H++4e->2H2),長時間的電泳將使陽極變酸,陰極變堿。一個好的緩沖系統(tǒng)應有較強的緩沖能力,使溶液兩極的pH保持基本不變。
 
電泳緩沖液的另一個作用是使溶液具有一定的導電性,以利于DNA分子的遷移,例如,一般電泳緩沖液中應含有0.01-0.04mol/L的Na+離子,Na+離子的濃度太低時電泳速度變慢;太高時就會造成過大的電流使膠發(fā)熱甚至熔化。
 
電泳緩沖液還有一個組分是EDTA,加入濃度為1-2mmol/L,目的是螯合Mg2+等離子,防止電泳時激活DNA酶,此外還可防止Mg2+離子與核酸生成沉淀。
 
電泳緩沖液的配制方法
1、MOPS
MOPS Buffer,即3-嗎啉丙磺酸緩沖液,屬于生物緩沖劑,可作為二維凝膠電泳中等電聚焦電泳(IEF)的電解質(zhì)系統(tǒng)成分;還可應用于Northern雜交,作為RNA的分離和轉(zhuǎn)膜時的緩沖液。
 
常用的10×MOPS Buffer配制方法如下:
(1)稱量41.8 g MOPS,溶解于約700mL DEPC處理水中;
(2)使用2 N NaOH 調(diào)節(jié)pH值至7.0;
(3)向溶液中加入DEPC處理的1M NaOAC 20mL、0.5M EDTA(pH8.0) 20mL;
(4)定容至1 L,用0.45 μm 濾膜過濾除去雜質(zhì),室溫避光保存。
 
2、TAE
TAE是使用最廣泛的緩沖系統(tǒng)。其特點是超螺旋在其中電泳時更符合實際相對分子質(zhì)量(TBE中電泳時測出的相對分子質(zhì)量會大于實際分子質(zhì)量),且雙鏈線狀DNA在其中的遷移率較其他兩種(TAE和TBE)緩沖液快約10%,電泳大于13kb的片段時用TAE緩沖液將取得更好的分離效果,此外,回收DNA片段時也易用TAE緩沖系統(tǒng)進行電泳。
 
50×TAE Buffer 配制方法:
1。稱量Tris 242g,EDTA 18.612g于1L燒杯中;
2。向燒杯中加入約800ml去離子水,充分攪拌均勻;
3。加入57.1ml的冰乙酸,充分溶解;
4。用NaOH調(diào)pH至8.3,加去離子水定容至1L后,室溫保存。
使用時稀釋50倍或100倍 即1×TAE Buffer 或 0.5×TAE。
 
3、TBE
TBE(Tris硼酸),是一種PCR技術(shù)中用到的緩沖液。
 
TBE配方:
1、使用液(0.5×)
0.045mol/L Tris-硼酸 0.001mol/L EDTA 采用無菌水溶解混勻,溶液體積為1L。
2、濃貯存液(5×)
54gTris堿 27.5g硼酸 20ml 0.5mol/L EDTA 采用無菌水溶解混勻,NaOH調(diào)pH至8.0,溶液體積1L。
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