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核酸染料使用方法和注意事項

2020-05-14 10:49 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
    使用方法:

    1.膠染法(用法同EB) (1)制膠時加入GelRed核酸染料(例如:每50mL瓊脂糖溶液中加入5μL GelRed 10,000×儲液,以此比例類推)。 (2)按照常規方法進行電泳。 注意事項: 此方法染色染料用量相對較少,500 μL染料大約可以做100塊50 mL的膠。 由于GelRed具有良好的熱穩定性,可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加,而不需要等待溶液冷卻。搖晃,振蕩或者翻轉以保證染料充分混勻。也可以選擇將GelRed儲液加到瓊脂糖粉末和電泳緩沖液中,然后用微波爐或其他常用方式加熱以制備瓊脂糖凝膠。GelRed兼容所有常用的電泳緩沖溶液。 含有染料的預制凝膠溶液可以大量制備,并長期保存直到使用。 此方法不適合預制聚丙烯酰胺凝膠,對于聚丙烯酰胺凝膠請使用泡染法。

    2.泡染法 (1)按照常規方法進行電泳。 (2)用H2O將GelRed 10,000×儲液稀釋約3,300倍到0.1 M NaCl中,制成3×染色液。(例如將15μL GelRed 10,000×儲液和5 mL 1 M NaCl加到45 mL H2O中)。 (3)將凝膠小心地放入合適的容器中,如聚丙烯容器中,緩慢加入足量的3×染色液浸沒凝膠,室溫振蕩染色30 min左右,最佳染色時間根據凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同。對于含3.5~10%丙烯酰胺的凝膠,染色時間通常介于30 min到1 h,并隨丙烯酰胺含量增加而延長。

    注意事項:

    1)用泡染法染色時,染料用量較多,單次使用的染色液可重復使用3次左右。3×GelRed染色液可以大量制備,在室溫下避光保存直至用完。

    2)如果總是看到條帶彌散或分離不理想,建議使用泡染法染色以確認問題是否與染料有關。

    3)如果染色后問題依舊存在,則說明問題與染料無關,請嘗試:降低瓊脂糖濃度、延長凝膠時間以保證邊緣清晰、改進上樣技巧或選擇泡染法染色。

    3.預染法(最省染料的染色方法,按25μL體積上樣,500μL原液理論做20萬個樣品)

    1)該方法適用于瓊脂糖凝膠電泳和PAGE凝膠電泳

    2)工作液的配制:用電泳緩沖液將10000×的GelRed原液稀釋1000倍,即為10 X GelRed工作液。GelRed工作液可以置2-8℃冷藏一個月以上。

    3)制膠:按常規方法制膠,不含任何染料。

    4)樣品染色:向分析樣品中加入GelRed工作液和載樣緩沖液,室溫放置10分鐘,使GelRed與樣品中DNA充分結合。GelRed工作液加入量為總上樣量的1/10,使GelRed在上樣時的終濃度為1X.

    5)DNA Marker染色:將5μL DNA Marker和1μLGelRed工作液混勻,室溫放置5分鐘,使GelRed與DNA充分結合。

    6)上樣、電泳:按常規操作。 注意事項: 根據染料分子量小,帶電荷少的特性開發本染色方法,按照一塊膠10個樣品計算,500μL原液理論上可以完成2萬塊膠的染色。
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