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微生物的糖類發酵實驗說明

2020-05-27 9:38 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
糖發酵試驗是常用的鑒別微生物的生化反應,在腸道細菌的鑒定上尤為重要。絕大多數細菌都能利用糖類作為碳源和能源,但是它們在分解糖類物質的能力上有很大的差異。有些細菌能分解某種糖產生有機酸(如乳酸、醋酸、丙酸等)和氣體(如氫氣、甲烷、二氧化碳等);有些細菌只產酸不產氣。

不同的細菌可根據分解利用糖能力的差異表現出是否產酸產氣作為鑒定菌種的依據。例如大腸桿菌能分解乳糖和葡萄糖產酸并產氣;傷寒桿菌分解葡萄糖產酸不產氣,不能分解乳糖;普通變形桿菌分解葡萄糖產酸產氣,不能分解乳糖。發酵培養基含有蛋白胨,指示劑(溴甲酚紫),倒置的德漢氏小管和不同的糖類。當發酵產酸時,溴甲酚紫指示劑可由紫色(pH6.8)變為黃色(pH5.2)。氣體的產生可由倒置的德漢氏小管中有無氣泡來證明。


糖發酵試驗通常采用試管、德漢氏小管、試管架及各種糖類試劑等多種試劑和耗材,操作繁瑣,耗時較長。如何能夠簡便試驗流程,節省時間呢?近年來,HiMedia公司的生產的糖發酵試劑盒在國際上悄然流行。

該試劑盒含35項糖發酵檢查,其中A盒和B盒各含12項糖發酵試驗,C盒含11項糖發酵試驗和1個對照試驗,通過微生物發酵反應,培養基顏色發生變化。

A盒:乳糖、木糖、麥芽糖、果糖、葡萄糖、半乳糖、棉子糖、海藻糖、蜜二糖、蔗糖、L-阿拉伯糖、甘露糖

B盒:菊粉、葡糖酸鈉、甘油、水楊苷、己六醇、肌醇、山梨醇、甘露醇、核糖醇、阿糖醇、赤藻糖醇、-甲基-D-葡萄糖苷

C盒:鼠李糖、纖維二糖、松三糖、α-甲基-D-甘露糖苷、木糖醇、鄰硝基酚-β半乳糖苷(ONPG)、七葉苷、D-阿拉伯糖、檸檬酸鹽、丙二酸、山梨糖、對照

待鑒定菌種應先進行分離和純化。可在HiMedia營養瓊脂或腦心浸膏瓊脂上挑取一個菌落,接種在5ml腦心浸膏肉湯中,在35-37℃培養4-6小時,直到在620nm處,接種液濁度≥0.5OD。一些苛養菌可能需要孵育超過6小時,以保證接種液濁度達到0.5OD。

無菌打開試劑盒,撕掉封條。每孔接種50μl上述菌液。也可用接種環劃線。在35±2℃孵育18-24小時即可,顯色結果與《結果詮釋表》、《菌種標準表》比對后,從而對菌種作出鑒定,幾乎包含所有的糖類發酵實驗,一次性即可出實驗結果,方便快
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