什么是內毒素？

細菌內毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁上的一種脂多糖（LipopolySaccharide,LPS）和蛋白的復合物，當細菌裂解時便會大量釋放出來。內毒素單位為EU。

內毒素對試驗的影響

內毒素存在極大程度地影響轉染效率。同時內毒素還可能激活免疫細胞的非特異反應，造成實驗中的假陽性。因此，為了保證高轉染率和轉染細胞高存活率，必須從質粒制備的過程中將內毒素去除。

內毒素和質粒的關系

由于內毒素兩親性和負電荷性，性質類似于DNA，因此在質粒純化中會伴隨質粒一同被純化出來。質粒中內毒素含量的高低常用EU/μg質粒表示。

按照EU/μg大小，質粒被分為三個級別：測序級別（>50EU/μg）、轉染級別(<50EU/μg)和無內毒素級別(<0.1EU/μg)。

再次強調

當你提取的質粒DNA是為了轉染原代細胞、懸浮細胞或者敏感細胞；進行基因沉默研究、細胞注射顯微操作；進行基因治療或者DNA疫苗等要求極為嚴格的實驗，就應該考慮Endotoxin-Free的質粒。

2017年3月，張鋒課題組在《Nature Protocols》發表的《Genome-scaleCRISPR-Cas9 knockout and transcriptional activation screening》中，Endotoxin-Free的質粒獲得被列為 Critical Step，同時推薦該廠家的NucleoBond Endotoxin Free Plasmid DNA kit，可避免病毒包裝和細胞培養過程中減少了內毒素殘留的影響。