問：我養的是RAW264.7細胞，不知道為什么長得這么快？而且消化也很容易，好像和園子里其他養RAW細胞的很不一樣。一般傳代（1傳2）后大概16－20個小時左右就能夠長到90％，請問是應該一定等到24小時再傳代，還是可以等長到90％（<24小時）如果沒到24小時就傳代的話，會對細胞狀態有影響么？

答：很多試驗中要求分盤后24h時再開始實驗（如轉染），除了讓細胞充分貼壁，還有一個重要原因就是使細胞達到正常代謝水平。從你的描述來看，如果細胞貼壁還比較快的話，個人認為可以進行傳代，若細胞密度過高達接觸抑制，細胞比較容易老化。

還有建議最好傳代時采用更低一些的稀釋度（1:3或者更低）。 感覺1:2太高了，建議到ATCC上查找一下，會找到最佳的subcultivation ratio。以便保證細胞的最佳狀態，不要舍不得扔細胞，subculture的時候把細胞全用上，你的細胞長得快，頻繁的subculture，細胞不但不能優化還可能會發生變異。

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問：請問1:2太高了是什么意思啊？是不是要1:3以上傳代呢？因為如果傳得太稀了，細胞長起來比較慢，可能有群集效應。所以一般每天傳代，到底傳代頻繁是能夠改善細胞狀態還是像你所說得會造成變異呢？

答：剛幫你查下：RAW 264.7，Subcultivation ratio: A subcultivation ratio of 1:3 to 1:6 is recommended。Medium renewal: Replace or add medium every 2 to 3 days。所以說你1：2傳太高了，是這個意思。建議加大傳代比率，1：3或1：4傳。反復傳代勞命傷財，對細胞也有害，特別是細胞未到24h。細胞傳代的比率要適當。細胞太少，生長慢，因細胞生長需相互間有信號傳導。

細胞太多，也不好，因細胞太多會有“接觸抑制”。我也從ATCC上看過這個，不過由于我們養的細胞不可能和他們的條件完全一樣，所以對于傳代就不可能完全按照它們說的。不過看來還是有一定的道理哦。現在覺得，其實1：3傳代可能更適合現在的細胞生長速度，長得太快太慢了，細胞都擠的變圓了。細胞太少的時候會抑制它們的生長速度。

問：請教一下，為什么細胞太少的時候會抑制它們的生長速度呢？

答：細胞生長需要一定的輔因子，而這些不僅要求血清供給，還有細胞在培養過程中生成的，若細胞太少，會導致這類因子不足。有時候會在培養細胞時候，放一些伴生長細胞是這個原因，好像叫保姆細胞。我養的是骨肉瘤細胞，生長速度也很快。

我一般等長滿了就傳代，不是特別關注時間。你在傳代分瓶的時候多分幾瓶。但也不能太多，因為細胞太少的時候會抑制它們的生長速度。看是什么細胞了，如是生長比較旺盛的細胞，只要貼壁情況良好就可以傳。我培養的是hela細胞。復蘇后不到24小時的換液以后，過了-6小時就可以傳代了。但是好像對其他多數細胞建議還是24小時后傳。