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血球計數板細胞計數法

2020-07-17 11:17 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑


細胞計數法是用來計數細胞懸液中細胞數量的一種方法。一般利用計數板(血球計數板)進行。即可用于分離(散)細胞培養接種前計數所制備的細胞懸液中的細胞數量,也可用于對培養物的細胞數量進行計數。不論計數的對象如何,均須制備分散的細胞懸液。
 

一、步驟

1、制備細胞懸液:對于懸液培養的細胞,可直接進行下面的步驟2(計數與計算過程)。如果計數對象為貼壁生長的細胞,首先需將培養物按如下步驟制備成細胞懸液。

1)、終止培養,將培養液吸出,用PBS洗培養物一次。

2)、給培養瓶內加入1ml 0.25%胰蛋白酶溶液,于37℃消化3~5min 。期間不斷在鏡下觀察。當細胞變圓接近脫壁時,棄消化液。

3)、加入一定量的培養液(如果這些培養細胞不再有用,可加PBS),用吸管吹打,使細胞脫壁而制成細胞懸液。

2、計數與計算過程

1)、在細胞計數板中央放置計數專用的蓋玻片。

2)、用玻璃虹吸管吸取細胞,讓虹吸管在蓋玻片上或下側的計數板凹蹧處流出懸液,至蓋玻片被液體充滿為止。

3)、置顯微鏡下計數四角大方格內的細胞總數。對于壓線的細胞只計數在上線和左線者,對于細胞團按單個細胞計數。

4)、按下式計數細胞懸液的密度:細胞密度=(4個大格細胞總數/4)×104個/ml 。

二、注意事項:

1)、務必使分散成單個細胞,取樣計數前,充分混勻細胞懸液。

2)、顯微鏡下計數時,遇到2個以上細胞組成的細胞團,應按單個細胞計算。如果細胞團>10%,說明細胞分散不充分。
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