一、概念

    1、細胞系（Cell Line）：原代培養舞經首次傳代成功即成細胞系，由原先存在于原代培養物中的細胞世系（Lineage of Cells）所組成。

    2、細胞株（Cell Strain）：通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物稱為細胞株。細胞株的特殊性質或標志必須在整

    個培養期間始終存在。如果不能繼續傳代或傳代數有限，稱為有限細胞株（finitecell strain）；如果可以連續傳代，稱為連續細胞株（continuous cellstrain）。對于人類腫瘤細胞，在體外培養半年以上，生長穩定，并連續傳代的即可稱為連續性株或系。

    二、建立細胞系（或株）的要求

    什么樣的體外培養群可被認可為己鑒定的細胞，視具體情況而定，無統一規定。對于用作原代培養的細胞只要供體均一，取材部位及組織種類等條件穩定即可，如用做長期培養，特別是反復傳代的細胞，常需做如下說明：

    1、組織來源：細胞供體所屬物種，來自人體或者動物；

    個體性別、年齡；取材的器官或組織。

    如系腫瘤組織，應說明臨床和病理診斷，以及病歷號等。

    2、細胞生物學檢測：

    了解細胞一般和特殊的生物學性狀，如細胞一般形態，特異結構，細胞生長曲線和分裂指數，倍增時間，接種率等。

    如為腫瘤細胞，為說明來源于原腫瘤組織并保持惡性，須做軟瓊脂培養，異體接種致瘤和對正常組織侵潤力等實驗。

    3、培養條件和方法；應說明細胞系（或株）適應的生存環境，即指明使用的培養基、血清種類、用量以及適宜PH值。

    三、若干細胞建株的要點及基本過程

    （一）腫瘤細胞培養技術要點

    1、取材：材料主要來源于外科手術或活檢瘤組織，取材時避免用壞死組織，要挑選瘤細胞集中和活力較好的部位，瘤性轉移淋巴結或胸腹水是較好的培養

    材料。取材后盡快培養，因故不能立即培養者，可凍存。其培養方法及凍存方法同前述正常組織。

    2、成纖維細胞排除：在腫瘤組織中?；祀s有一些成纖維細胞，培養時能與瘤細胞同時生長，并常壓過癌細胞，導致癌細胞生長受阻以至消失，應仔細排除。排除方法常有：機械刮除法、反復貼壁法、消化排除法、膠原酶消化法等。

    3、提高腫瘤細胞培養存活率和生長率

    根據實驗經驗，腫瘤細胞在體外不易培養，建立能傳代的腫瘤細胞系更為困難。一般當腫瘤組成或細胞被原代培養后，要經過對新環境的適應才能生長，因此不能局限于一般培養法，須采用一些特殊措施。如：用適宜底物，鼠尾膠原底層及飼細胞底層等。用細胞生長因子，根據細胞種類不同選用不同的促細胞生長因子，如胰島素、氫化可的松，雌激素等。也可以考慮動物媒介培養。

    （二）人類淋巴母細胞建株方法

    l、4ml肝素抗凝血于離心管中，加入2ml RPMI 1640。

    2、混勻后沿管壁緩慢加到預置有4ml淋巴細胞分離液的液面上靜置30min。

    3、1500rpm，15min，吸取白細胞層（第二層）于另一離心管中。

    4、加RPMI 1640 5ml洗滌白細胞兩次。

    5、將白細胞接種至1ml RPMI 1640培養基中，加入10μl環胞霉素和100μl的EBV（EB病毒）液，混勻。

    6、水浴搖床，40次/分，37℃，3hr。

    7、1500rpm，15min。將細胞接種至1ml培養基中（內含谷氨酰胺1mM／ml）加入10μl環胞霉素，輕輕混勻，37℃培養。

    8、5天后觀察細胞轉化和生長情況，決定是否半量換液。一般半量換液l—2次，并維持環胞霉素的濃度。

    9、待轉化細胞數量明顯上升，并出現細胞團塊后，可轉入25ml細胞培養瓶中，加1—2ml培養基，37℃培養10—15天，一般每隔3—4天觀察一次，決定是否 換液，傳代。

    10、細胞生長達一定數量后凍存，凍存前應進行核型分析和存檔。