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不常見細菌的快速鑒別方法

2020-12-31 9:54 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
一. 不常見革蘭陰性菌

1. 布氏桿菌屬

布氏桿菌屬是一類革蘭陰性細小桿菌,牛、羊、豬等動物最易感染。人類接觸帶菌動物或食用病畜及其乳制品,均可被感染。布氏桿菌病廣泛分布世界各地,我國部分地區曾有流行。布氏桿菌屬分為羊、牛、豬、鼠、綿羊及犬布氏桿菌6個種,20個生物型。中國流行的主要是羊、牛、豬三種布氏桿菌,其中以羊布氏桿菌病最為多見。

布氏桿菌屬細菌為非抗酸性,無芽胞,無莢膜,無鞭毛,呈球桿狀(見圖1)。血瓊脂(BAP)上為透明或半透明、光滑且有光澤菌落。此細菌不在麥康凱瓊脂上生長。布氏桿菌屬細菌尿素陽性,觸酶、氧化酶陽性,而吲哚陰性。由于該菌屬細菌具有強的傳染性,因此一旦懷疑應送往LRN B級參考實驗室進行確認。

2. 空腸彎曲菌

空腸彎曲菌是一種人畜共患病病原菌,可以引起人和動物發生多種疾病,并且是一種食物源性病原菌,認為是引起全世界人類細菌性腹瀉的主要原因。其致病因素包括粘附、侵襲、產生毒素和分子模擬機制等四個方面,通過分子模擬機制可以引起最嚴重的并發癥一格林一巴利綜合征??漳c彎曲菌可以通過產生細胞緊張性腸毒素、細胞毒素和細胞致死性膨脹毒素而致病??漳c彎曲菌對紅霉素、新霉素、慶大霉素、四環素、氯霉素、卡那霉素等抗生素敏感,但近年發現了不少耐藥菌株及多重耐藥性菌株。

空腸彎曲菌菌體輕度彎曲似逗點狀。菌體一端或兩端有鞭毛,運動活潑,在暗視野鏡下觀察似飛蠅。有莢膜,不形成芽胞。微需氧菌,在含2.5~5%氧和10% CO2的環境中生長最好,在正常大氣或無氧環境中均不能生長,最適溫度為37~42℃。本菌在普通培養基上難以生長,在凝固血清和血瓊脂培養基上培養36小時可見無色半透明毛玻璃樣小菌落,單個菌落呈中心凸起,周邊不規則,無溶血現象??漳c彎曲生化反應不活潑,不發酵糖類,不分解尿素??蛇€原硝酸鹽,氧化酶和觸酶為陽性。能產生微量或不產生硫化氫,甲基紅和v-p試驗陰性,枸椽酸鹽培養基中不生長,在彎曲菌中馬尿酸呈陽性反應具有重要鑒定價值。

3.“HACEK”群細菌

HACEK是指一組革蘭陰性桿菌:嗜血桿菌屬(H)、放線桿菌屬(A)、人心桿菌屬(C)、艾肯菌屬(E)、金氏桿菌屬(K)。這組微生物的共同特征是易導致心內膜感染,約占全部感染性心內膜炎的5-10%,它們是導致正常人群(非靜脈藥物濫用者)心內膜炎的常見原因之一。所有這些微生物都是口咽部正常菌群的一部分,生長緩慢、喜好富二氧化碳環境。除心臟瓣膜感染,HACEK菌還導致其他感染:菌血癥、各類膿腫、腹膜炎、中耳炎、結膜炎、肺炎、化膿性關節炎、骨髓炎、尿路感染、傷口感染、腦膿腫、牙周感染。

嗜血桿菌屬因在生長過程中需含有生長因子X(氯化高鐵血紅素)和(或)V(輔酶Ⅰ)的血液瓊脂而得名。本屬細菌為革蘭陰性小桿菌,無動力,具有明顯的多型性,不形成芽胞,需氧或兼性厭氧。流感嗜血桿菌是嗜血桿菌屬最重要的病原菌,鏡下呈球桿狀、長桿狀、少數為絲狀。粘液型菌株有莢膜,毒力較強。菌落一般為光滑型,若與金黃色葡萄球菌在BAP上共同孵育,則在葡萄球菌菌落周圍生長的流感嗜血桿菌菌落較大,這叫做“衛星現象”。原因是金黃色葡萄球菌能合成較多的V因子,促進流感嗜血桿菌的生長。

放線桿菌屬為革蘭陰性桿菌,有時呈球形、橢圓形(見圖3)。兼性厭氧菌,無動力,無莢膜,在含血清或血液的培養基上生長良好,37℃培養2~3天后形成直徑約1mm的菌落。在肉湯培養液中生長呈顆粒狀。對人或動物致病的有伴放線放線桿菌、林氏放線桿菌和馬駒放線桿菌。伴放線放線桿菌因常見于人類的某些放線菌病的病灶中而得名。但也可單獨致病,如一些亞急性細菌性心內膜炎是由本菌引起的。本屬細菌能還原硝酸鹽,不產生吲哚,尿素陽性。

人心桿菌是心桿菌屬內唯一的種,是人的鼻腔和咽喉部的正常菌群,可引起心內膜炎、尿路感染、腦膿腫和牙周炎等疾病。大部分菌株可從血液中分離而來,有的菌株也可從腦脊液中分離而來。人心桿菌為無鞭毛、無莢膜、無芽孢,并具有多形性的革蘭陰性桿菌(見圖4)。革蘭染色不易被脫色,單個存在或成對排列,有時形成短鏈或呈葡萄狀排列。該菌為兼性厭氧菌,某些菌株在初代分離時需要CO2,在生長過程中要有一定濕度,在干燥環境中不生長;在35~37 ℃均可生長,但在22 ℃或42 ℃均不生長。該菌在BAP上不溶血,經24h 培養后菌落很小,48h 后可達1mm,菌落為圓形、凸起、光滑、有光澤而邊緣整齊,某些菌株的菌落可長入培養基中,使培養基表面瓊脂凹陷。麥康凱瓊脂上不生長。人心桿菌氧化酶陽性,觸酶陰性,吲哚陽性,不還原硝酸鹽。

嚙蝕艾肯菌是革蘭陰性多形性球桿菌(見圖5),有一種漂白劑的氣味,兼性厭氧,是口腔和許多其他粘膜表面的正常菌群。嚙蝕艾肯菌是人咬傷后發生的蜂窩織炎的病原體,它也是已發現靜脈藥物濫用者軟組織感染和心內膜炎主要病原體。它也能導致各種各樣的肺部感染(如膿胸、肺炎、敗血癥栓子),類似嚴格偏性厭氣菌。

大多數嚙蝕艾肯菌性心內膜炎患者有潛在的生物瓣膜病變。與其他HACEK菌不同,大多數嚙蝕艾肯菌性心內膜炎與靜脈藥物濫用有關。嚙蝕艾肯菌在培養基上凹陷生長,吲哚陰性,鳥氨酸陽性。

金氏桿菌屬是革蘭陰性球桿菌,有3個種:

金氏金氏桿菌、產吲哚金氏桿菌、去硝化金氏桿菌,只有金氏金氏桿菌引起心內膜炎。與其他HACEK菌不同,金氏桿菌感染進展相當迅速。金氏金氏桿菌在BAP呈大的、光滑、不透明、白色或米色、β-溶血菌落,與腸桿菌科細菌相似,但在麥康凱瓊脂上不生長。金氏金氏桿菌觸酶陰性,氧化酶陽性,通常分離自無菌組織和體液。

4. 土拉熱弗朗西斯氏菌

土拉熱弗朗西斯氏菌簡稱土拉弗氏菌,是引起土拉弗氏菌病(野兔熱)的病原菌。人類感染此病多因接觸患病動物而致,或攝食污染食物和吸入污染空氣所致。土拉桿菌是革蘭陰性多形性細菌,鏡下呈球狀、桿狀、豆狀和絲狀等,無芽胞、無動力、有莢膜。該菌營養要求較高,在普通瓊脂培養基和肉湯中均不生長,只在加入

胱氨酸、半胱氨酸、血液或卵黃的培養基中生長,形成圓形、光滑、灰色、凸起、有粘性的菌落,在雞胚絨尿膜上也能生長,在卵黃囊中生長尤為茂盛,最適生長溫度35℃ ~37℃ 。若從動物或人體初次分離,一般需要3—5天。常用培養基主要有半胱氨酸葡萄糖血液瓊脂平板(Francis培養基)、卵黃瓊脂平板和半胱氨酸巧克力瓊脂。土拉熱弗朗西斯氏菌氧化酶陰性,觸酶陰性或弱陽性,β-內酰胺酶陽性。由于該菌具有強傳染性,必須在生物安全柜中處理,一旦懷疑需送往LRN參考實驗室進行確認。

5. 卡他莫拉菌

卡他莫拉菌為革蘭陰性雙球菌。過去一直認為卡他莫拉菌是對人體無致病性的上呼吸道正常寄居菌,但是,近20多年的研究發現,該菌不僅可以引起兒童和老年人的上呼吸道感染,而且還是引起成人下呼吸道感染的重要病原菌,是兒童上頜竇炎、中耳炎、肺炎以及成人的慢性下呼吸道感染的第3位最常見致病菌,僅次于流感嗜血桿菌和肺炎鏈球菌??ㄋ贐AP上不溶血,整個菌落可推動,氧化酶、觸酶陽性,丁酸鹽、吲哚酚醋酸鹽陽性。

6. 奈瑟菌屬

奈瑟菌屬細菌為革蘭陰性球菌,單個或成雙排列,無芽孢、無鞭毛、有菌毛,觸酶、氧化酶陽性,包括腦膜炎奈瑟菌(見圖7)、淋病奈瑟菌等9種,其中有臨床意義的致病菌為腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌。BAP上呈透亮不溶血菌落,氧化酶、γ-谷氨酰氨肽酶陽性為腦膜炎奈瑟菌。BAP上呈淺灰色不溶血菌落,氧化酶、β-半乳糖苷酶陽性為乳糖奈瑟菌。淋病奈瑟菌在巧克力瓊脂上呈小的、有光澤的菌落,通常在BAP、MH和胰大豆瓊脂上生長,氧化酶陽性,觸酶強陽性(30%過氧化氫),而γ-谷氨酰氨肽酶、β-半乳糖苷酶陰性。

二. 不常見革蘭陽性菌

1.產單核李斯特菌

李斯特菌是一種典型的胞內寄生的革蘭陽性短桿菌,共分為2個群,7個種。第一群包括產單核細胞李斯特菌、伊氏李斯特菌、無害李斯特菌(又名英洛克李斯特菌) 、韋氏李斯特菌及西爾李斯特菌;第二群為較少見的格氏李斯特菌和莫氏李斯特菌。其中產單核細胞李斯特菌和伊氏李斯特菌具有致病性,且產單核細胞李斯特菌是惟一能引起人類疾病的,是一種人獸共患病的病原菌,能引起人、畜的李斯特菌病,感染后主要表現為敗血癥、腦膜炎、流產和單核細胞增多。這種病菌在自然界廣泛存在,食品中存在的產單核細胞李斯特菌對人類的安全具有危險,世界衛生組織(WHO)指出,水產品、奶及奶制品、肉制品均有不同程度的污染,并曾將其列為20世紀90年代食品中四大致病菌之一。

產單核李斯特菌是一種革蘭陽性短小桿菌,通常成雙排列,偶爾可見雙球狀(見圖8)。有鞭毛,但僅在18~20℃有動力,在37℃動力緩慢。無芽胞,一般不形成莢膜,但在含有血清的葡萄糖蛋白胨水中能形成粘多糖莢膜。兼性厭氧,對營養要求不高,普通培養基上可生長,在血平板上會形成β-溶血。最適的生長溫度是30~37℃,并可在4℃條件下進行冷增菌。本菌耐堿不耐酸,對熱較為敏感,加熱50℃10min即可死亡同時該菌對多種抗生素敏感,以氨芐青霉素為首選,尚有青霉素、鏈霉素、四環素、氯霉素和紅霉素等敏感。但該菌對磺胺、桿菌肽和多粘菌素耐藥。產單核李斯特菌觸酶陽性,馬尿酸鹽陽性。

2.鏈球菌屬

鏈球菌屬細菌廣泛分布于自然界、人和動物腸道、健康人鼻咽部等,致病鏈球菌可引起各種化膿性炎癥、猩紅熱、風濕熱等疾病。本屬細菌為革蘭陽性球菌,鏈狀排列,無鞭毛,無芽孢,可形成莢膜,在液體培養基中易形成長鏈,致病性強的菌株多為長鏈,在膿汁標本中多為短鏈。本屬細菌為需氧或兼性厭氧菌,部分為厭氧菌。營養要求較高,需在加有血液、血清等成分的培養基生長良好。根據鏈球菌在血液瓊脂平板上菌落周圍溶血情況,有草綠色溶血環的稱為α型溶血,如草綠色鏈球菌;呈透明溶血環的稱為β型溶血,稱β溶血性鏈球菌或化膿性鏈球菌;也有不溶血的,稱為γ型溶血,如腸球菌。根據族特異性抗原將鏈球菌分A-T 18個族。鏈球菌屬細菌觸酶陰性?;撴溓蚓?A群) PYR陽性。無乳鏈球菌(B群) 馬尿酸鹽陽性,CAMP陽性。草綠色鏈球菌PYR陰性,LAP陽性,膽汁溶菌試驗陰性。肺炎鏈球菌鏡下為革蘭陽性球菌,矛尖狀,成雙排列,在人和動物體內形成莢膜,菌落細小、周圍有草綠色溶血環,48小時后,由于菌落自溶,呈現“臍窩狀”,Optochin敏感試驗陽性,膽汁溶菌試驗陽性,菊糖分解試驗陽性。
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