（一）溫度

哺乳動物及人源細胞培養的最適溫度為35-37V，對低溫耐受力比高溫強。39℃以上的培養環境細胞容易受損，甚至死亡。不低于0℃時（(0-34℃)，細胞能生存，但代謝降低、分裂延緩。

（二）氣體環境和pH

動物細胞培養需要O2和CO2。O2通量過大對細胞有毒害，一般使用空氣中的O2含量就可以。CO2則與維持培養基的pH有關，細胞培養的最佳pH為7.2-7.4，通過緩沖系統和調節CO2含量，可維持正常pH。

開放培養要求5%CO2環境、HEPES(羥乙基哌嗪乙硫磺酸）10-50mmol/ml可防止培養基的pH變化。含Earle's緩沖系統的培養基適合于5%CO2的培養條件，Hank's緩沖系統的培養基僅含有0.35g/LNaHCO3，不能用于5%CO2的環境，若放入CO2培養箱，溶液將迅速變酸，使用時應注意。

（三）濕度和光

利用多孔細胞培養板、方瓶、培養皿等開放培養時，相對濕度應控制在95％以上。

動物細胞培養需避光，紫外線或可見光均可造成核黃素、酪氨酸、色氨酸等產生有毒的光產物，抑制細胞生長，降低其貼壁能力。

（四）影響細胞生長的其他因素

細胞接觸橡膠用品，收集細胞時離心速度過大，細胞接種密度過低，細胞懸液或細胞培養物中氣泡形成等，均對細胞不利，會導致細胞死亡或生長繁殖抑制。