原理：轉移電泳是將經聚丙烯酰胺凝膠電泳 分離出的蛋白質譜直接轉移到硝酸纖維膜上，而形成固定相，并同時排除各種干擾物質，保持其天然構象和生物學活性，完成在凝膠中難以進行的各種生物試驗。

材料

1.瓊脂 糖

2.丙烯酰胺

3.甲叉雙丙烯酰胺

4.十二烷基磺酸鈉(SDS)

5.硝酸纖維膜濾紙 孔徑0.45μm

6.瓊脂糖凝膠電泳緩沖液 0.89mMol/L Tris—89mmol/L 硼酸—2.5mMol/L EDTA (pH8.3)。

7.SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳緩沖液 0.05Mol/L Tris—0.384Mol/L 甘氨酸—0.1%SDS(pH8.3)。

8.蛋白質轉移電泳緩沖液 25mMol/L Tris—192mMol/L 甘氨酸—20%甲醇(pH8.3)。

9.溴乙啶溶液 稱取5mg溴乙啶，用無離子水溶解。定容到10ml，取1ml稀釋到1 000ml，最終濃度為0.5μg/ml。10.考馬斯亮蘭R-250染色液 0.25%考馬斯亮蘭R-250-10%醋酸-45%甲醇。

11.氨基黑染色液 在含10%醋酸的甲醇中加入氨基黑10B至飽和。

12.垂直板型及水平板型凝膠電泳槽

13.轉移電泳槽

14.直流穩壓電源0V~800V，0mA~100mA

操作方法

1.SDS—聚丙稀酰胺凝膠電泳(垂直板型)分離蛋白質。

⑴凝膠的制備：丙烯酰胺 15.00g ;甲叉雙丙烯酰胺 0.40g ;0.37Mol/L Tris—HCl(pH8.3)50ml ，此為丙烯酰胺母液，過濾后4℃保存備用。丙烯酰胺母液 8.30ml ;N、N、N、N—四甲基乙二胺(DEMED)250μl ;10%SDS 0.25ml ;0.375Mol/L pH8.8 Tris-HCl16.45ml 混合即為10%分離膠。

丙烯酰胺母液 1.30ml;TEMED 15.00μl ;10%SDS 0.10ml ;0.125Mol/L pH6.8Tris-HCl8.60ml 制成4%濃縮膠。

將分離膠與濃縮膠真空抽氣10min~15min，備用。

⑵凝膠板的制備及加樣：取1%的瓊脂將凝膠膜底部的縫隙封固。在10%的分離膠中加入10%過硫酸銨0.25ml，混勻后，立即沿玻璃壁緩緩加入膠膜中，上端留出5cm的高度，然后用帶有細針頭的注射器輕輕地向膠面加入蒸餾水，靜置數分鐘，水膠界面消失，約20min～30min界面清晰(凝膠已聚合)，用注射器將水吸出，并用濾紙吸干余水。在4%濃縮膠中加入10%過硫酸銨0.4ml，混勻后，沿玻璃壁緩慢倒入已聚合的分離膠的上面，立即插進樣品槽模板。待凝膠聚合后(約20min～30min)，輕輕拔出樣品槽模板。將電泳緩沖液加入上、下電泳槽。將分離的蛋白質樣品用0.01Mol/L Tris-HCl(pH8.0)-0.001Mol/L EDTA-1%SDS-5%硫基乙醇溶液作1︰1稀釋，100℃加熱處理3min之后，加入甘油10%及適當量溴酚蘭，用微量注射器將樣品注入樣品槽中，蛋白質最后濃度一般為0.05mg/ml～1mg/ml。

⑶電泳：上端接陰極，下端接陽極。電壓120V、電流30mA，電泳時間5h~6h，待染料泳至距底部約1cm處時斷電。

⑷染色：切下一部分凝膠，用考馬斯亮蘭R-250染色作為對照。其余部分作轉移電泳。