細胞在體外培養中所需的條件與體內細胞基本相同。

1、無污染環境

培養環境無毒和無菌是保證細胞生存的首要條件。當細胞放置于體外培養時，與體內相比細胞丟失了對微生物 和有毒物的防御能力，一旦被污染或自身代謝物質積累等，可導致細胞死亡。因此在進行培養中，保持細胞生存環境無污染、代謝物及時清除等，是維持細胞生存的基本條件。

2、恒定的溫度

維持培養細胞旺盛生長，必須有恒定適宜的溫度。人體細胞培養 的標準溫度為36.5℃±0.5℃，偏離這一溫度范圍，細胞的正常代謝會受到影響，甚至死亡。培養細胞對低溫的耐受力較對高溫強，溫度上升不超過39℃時，細胞代謝與溫度成正比;人體細胞在39-40℃1小時，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復;在40-41℃1小時，細胞會普遍受到損傷，僅小半數有可能恢復;41-42℃1小時，細胞受到嚴重損傷，大部分細胞死亡，個別細胞仍有恢復可能;當溫度在43℃以上1小時，細胞全部死亡。

3、氣體環境

氣體是人體細胞培養生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環，產生供給細胞生長增殖的能量和合成細胞生長所需用的各種成分。開放培養時一般把細胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環境中。

二氧化碳既是細胞代謝產物，也是細胞生長繁殖所需成分，它在細胞培養中的主要作用在于維持培養基的PH值。大多數細胞的適宜PH為7.2-7.4，偏離這一范圍對細胞培養將產生有害的影響。但細胞耐酸性比耐堿性大一些，在偏酸環境中更利于細胞生長。有資料顯示，原代羊水細胞培養PH6.8時最適。

細胞培養液PH濃度的調節最常用的為加NaHCO3的方法，因為NaHCO3可供CO2，但二氧化碳易于逸出，故最適用于封閉培養，而羥乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES)因其對細胞無毒性，也起緩沖作用，有防止PH迅速變化的特性而用于開放細胞培養技術中，其最大優點是在開放式培養或細胞觀察時能維持較恒定的PH值。

4、細胞培養基

培養是既是培養細胞中供給細胞營養和促使細胞生殖增殖的基礎物質，也是培養細胞生長和繁殖的生存環境。培養基的種類很多，按其物質狀態分為半固體培養基和液體培養基兩類;按其來源分為合成培養基和天然培養基。

(1)合成培養基：合成培養基是根據細胞所需物質的種類和數量嚴格配制而成的。內含碳水化合物、氨基酸、脂類、無機鹽、維生素、微量無素和細胞生長因子等。單獨使用細胞雖有生存但不能很好的生長增殖。

(2)天然培養基：使用最普遍的天然培養基是血清，基本以小牛血清最普遍。血清由于含有多種細胞生長因子、促粘附因子及其多種活性物質。與合成培養基合用，能使細胞順利增殖生長。常見使用最為5-20%。