產品名：細胞凋亡-Hoechst染色試劑盒
規    格：100T
用    途：快速簡便的細胞凋亡檢測
注意事項：由固定液、染色液、熒光封片劑組成,貼壁細胞,適用于懸浮細胞和組織切片。
儲存條件：—20℃,避光,12個月


產品說明：細胞凋亡-Hoechst染色試劑盒(HoechstStainingKit)是一種采用經典的Hoechst33258進行細胞凋亡檢測的快速簡便的試劑盒。當細胞發生凋亡時，染色質會固縮，Hoechst33258染色后在熒光顯微鏡下觀察，正常細胞的細胞核呈正常的藍色，而凋亡細胞的細胞核會呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染，顏色有些發白。HoechstStainingKit經常用于培養的貼壁或懸浮細胞以及組織切片的細胞凋亡檢測。該試劑盒檢測細胞含量范圍一般為0.1～1×106之間。

自備材料：
1、可觀察藍光的熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡
2、PBS或生理鹽水
3、載玻片、蓋玻片
4、預冷固定液：預冷的70%乙醇或4%多聚甲醛

操作步驟(僅供參考)：
(一)貼壁細胞
1、取潔凈蓋玻片在70%乙醇中浸泡5min或更長時間，無菌超凈臺內吹干或用無菌的PBS或生理鹽水洗滌3次，再用細胞培養液洗滌1次。將蓋玻片置于6孔板或其他培養皿內，接種細胞培養過夜，使融合率約為50%～80%。
2、加入干預條件使細胞發生凋亡后，吸盡培養液，加入Hoechst固定液0.5ml，固定10min或更長時間(可4℃過夜)。
3、去除固定液，用PBS或生理鹽水洗2次，每次3min，吸盡液體。洗滌時宜用搖床，或手動晃動。
4、加入Hoechst33258染色液0.5ml，孵育5min。也宜用搖床，或手動晃動數次。
5、棄染色液，用PBS或生理鹽水洗2次，每次3min，吸盡液體。洗滌時宜用搖床，或手動晃動。
6、滴一滴抗熒封片劑于載玻片上，蓋上貼有細胞的蓋玻片，讓細胞接觸封片劑，盡量避免氣泡。
7、熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。激發波長350nm左右，發射波長460nm左右。

(二)懸浮細胞
1、離心收集細胞樣品于1.5ml離心管內并棄液，加入Hoechst固定液0.5ml，緩緩懸起細胞，固定10min或更長時間(亦可4℃過夜)。
2、低速離心去除固定液，用PBS或生理鹽水洗2次，每次3min。洗滌時手動晃動數次。
3、低速離心離心后吸去大部分液體保留約50μl液體，再緩緩懸起細胞，滴加至載玻片上，盡量使細胞分布均勻。
4、稍晾干，使細胞貼在載玻片上不易隨液體流動。
5、滴加Hoechst33258染色液0.5ml，孵育5min。用吸水紙從邊緣吸去液體，微晾干。
6、棄染色液，用PBS或生理鹽水洗2次，每次3min，吸盡液體。洗滌時宜用搖床，或手動晃動。
7、滴一滴抗熒光封片劑于載玻片上，蓋上一潔凈的蓋玻片，盡量避免氣泡。
8、熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。激發波長350nm左右，發射波長460nm左右。

(三)組織切片
1、常規包埋切片。
2、用PBS或生理鹽水洗2次，每次3min。洗滌時手動晃動數次。
3、均勻滴上Hoechst33258染色液0.5ml，孵育5分鐘。
4、棄染色液，用PBS或生理鹽水洗2次，每次3min，吸盡液體。洗滌時宜用搖床，或手動晃動。
5、將切片置于載玻片上，滴一滴抗熒光封片劑，蓋上一潔凈的蓋玻片，盡量避免氣泡。
6、熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。激發波長350nm左右，發射波長460nm左右。

注意事項：
1、熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡快檢測。使用抗熒光封片劑時也應避光操作。
2、在為了獲得細胞沉淀的離心的過程中，對于特殊細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當提高離心力或延長離心時間。
3、Hoechst33258染色液對人體有一定刺激性，請注意適當防護。
4、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。