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做實(shí)驗(yàn)應(yīng)該選擇原代細(xì)胞還是細(xì)胞株?

2021-06-01 9:56 作者:洛辰 來源:上海遠(yuǎn)慕生物試劑
原代細(xì)胞(primary cell)是指從機(jī)體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行模擬機(jī)體培養(yǎng)的細(xì)胞,稱為原代細(xì)胞。

細(xì)胞系(cell line)是原代細(xì)胞經(jīng)首次傳代成功后即為細(xì)胞系。泛指一般可能傳代的細(xì)胞。其中能夠連續(xù)傳代的細(xì)胞叫做連續(xù)細(xì)胞系或無限細(xì)胞系,不能連續(xù)培養(yǎng)的稱為有限細(xì)胞系。

大多數(shù)細(xì)胞系已經(jīng)經(jīng)過了數(shù)十年的培養(yǎng),雖然它們還能很好的適應(yīng)二維培養(yǎng)環(huán)境,但這些細(xì)胞系通常在遺傳學(xué)和表型上與其起源組織起源細(xì)胞不同,甚至形態(tài)有改變。

然而,原代細(xì)胞不存在這些問題,他們通常是直接從組織中分離的、具有有限壽命和有限增值能力的細(xì)胞,因此原代細(xì)胞擁有正常細(xì)胞的形態(tài),并且能夠體現(xiàn)出該細(xì)胞在生物體內(nèi)所應(yīng)該具備的標(biāo)記和功能。例如內(nèi)皮細(xì)胞系常缺乏各種功能性標(biāo)志蛋白的表達(dá),而原代內(nèi)皮細(xì)胞具有這些關(guān)鍵特征。

與細(xì)胞系相反,原代細(xì)胞是非常敏感的細(xì)胞,需要傳統(tǒng)培養(yǎng)基之外的額外營養(yǎng)物質(zhì)。為了優(yōu)化原代細(xì)胞的存活和生長(zhǎng),需要針對(duì)每種細(xì)胞類型選擇特定的培養(yǎng)基。例如,內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)營養(yǎng)的需求與上皮細(xì)胞或神經(jīng)元有很大區(qū)別,因此需要特制的內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基。

而傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)基依靠血清提供生長(zhǎng)因子、激素、脂質(zhì)和其他的未知組分,以支持細(xì)胞的生長(zhǎng)。但對(duì)于原代細(xì)胞,高血清水平可導(dǎo)致細(xì)胞分化,或促進(jìn)污染細(xì)胞如成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)。

此外,添加血清也受到成本上升及不同批次間差異性的困擾。配制具有很少或沒有血清的特殊培養(yǎng)基則可以避免這些問題,并且更加有利于促進(jìn)特定類型原代細(xì)胞的生長(zhǎng)。而且,其他一些實(shí)踐,例如在更多的生理學(xué)相關(guān)底物上接種原代細(xì)胞而不是使用合成聚合物,可以顯著的促進(jìn)細(xì)胞貼壁、增殖及保持純度。

盡管原代細(xì)胞可能更難培養(yǎng),但是使用原代細(xì)胞而獲得的數(shù)據(jù)具有更好的相關(guān)性,并且更能反映體內(nèi)環(huán)境。

原代細(xì)胞:從體內(nèi)直接分離的細(xì)胞。功能、代謝、形態(tài)類似體內(nèi)細(xì)胞的特點(diǎn),因此原代細(xì)胞適用于分析單個(gè)細(xì)胞形態(tài)、代謝、功能。原代細(xì)胞的缺點(diǎn)是:細(xì)胞均一性差,因?yàn)閺奶囟ńM織取下來的原代細(xì)胞可能處于不同的發(fā)育時(shí)期。增殖能力差、培養(yǎng)時(shí)間受限、轉(zhuǎn)染效率低。

細(xì)胞株:原代細(xì)胞經(jīng)過長(zhǎng)期培養(yǎng)和篩選后,功能、代謝、形態(tài)趨于均一化的無限增殖細(xì)胞。適用于整體水平實(shí)驗(yàn)。優(yōu)點(diǎn)是:容易培養(yǎng)、好感染、干擾因素少、便于同步化、實(shí)驗(yàn)好操作。缺點(diǎn)是:與整體差別大、可能喪失原代細(xì)胞的特性,細(xì)胞株在長(zhǎng)期傳代過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生變異。所以同一個(gè)學(xué)名的細(xì)胞株,有可能有完全不同的形態(tài)、代謝、功能表現(xiàn)。不同代數(shù)的細(xì)胞株,性質(zhì)也可能完全不同。

原代細(xì)胞由于轉(zhuǎn)染效率低這個(gè)問題,應(yīng)用受到了限制。自從腺病毒誕生后,因?yàn)槠涑瑥?qiáng)的感染能力,克服了原代細(xì)胞難感染的問題,使得原代細(xì)胞的使用變得更加簡(jiǎn)單。由于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)后,很多時(shí)候需要做到動(dòng)物體內(nèi),由于原代細(xì)胞有體內(nèi)細(xì)胞的特點(diǎn),為了細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果更加趨向一致性,因此用原代細(xì)胞來進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)更值得考慮。
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