【目的和要求】
1. 了解pH對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響。
2. 學(xué)習(xí)測(cè)定酶的最適pH的方法。
【實(shí)驗(yàn)原理】
酶促反應(yīng)受環(huán)境pH的影響極為顯著。 通常各種酶只有在一定的pH范圍內(nèi)才表現(xiàn)它的活力，一種酶表現(xiàn)其活性最高時(shí)的pH值，稱為該酶的最適pH。低于或高于酶的最適pH時(shí)，酶的活性逐漸降低。不同酶的蕞適pH值不同。本實(shí)驗(yàn)仍以乳酸脫氫酶催化的反應(yīng)為例，學(xué)習(xí)測(cè)定酶的最適pH的方法。


【實(shí)驗(yàn)試劑和器材】
（一）試劑：
1. 不同pH值的緩沖液:
100ml 0.33M檸檬酸，100ml 0.33M磷酸，3.54g 硼酸，343ml 1M NaOH, 加水直到1升。用HCl滴定成pH值3.0、3.5、4.0、4.5直到12的不同pH值緩沖液。
2. 0.01M NADH
3. 0.1M 丙酮酸鈉
4. LDH


【實(shí)驗(yàn)試劑和器材】
（一）試劑：0.1M磷酸鉀緩沖液（pH 7.0）；0.01M NADH; 10M 丙酮酸鈉；LDH
（二）器材：紫外分光光度計(jì) ，移液槍，吸頭，1.5ml小離心管，離心管架


【實(shí)驗(yàn)方法】
（一）酶活性的測(cè)定：方法同實(shí)驗(yàn)7中的步驟1。
（二）pH對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響：
1. 在1.5 ml小離心管中分別加入：(總體積為1ml反應(yīng)液)
2. 混勻以上試劑，倒入比色皿中，然后將比色皿放入分光光度計(jì)后讀取340nm處OD值，加入0.02ml LDH使用液，迅速攪勻，使反應(yīng)開(kāi)始，測(cè)定反應(yīng)1分鐘OD值的變化。
3. 根據(jù)所測(cè)得的OD值的變化，計(jì)算出反應(yīng)初速度。