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HE染色石蠟切片的制作的七個(gè)步驟

2021-06-18 9:37 作者:洛辰 來(lái)源:上海遠(yuǎn)慕生物試劑
設(shè)備用具:切片機(jī)、恒溫箱、溶蠟箱、玻璃缸、載玻片、蓋玻片、手術(shù)刀片、鑷子、包埋盒。

試 劑 :10%福爾馬林、酒精、二甲苯、固體石蠟、蘇木精、酸水、氨水、酒精伊紅染色劑型、加拿大樹(shù)膠

(二)HE染色石蠟切片的制作過(guò)程
步驟一:取材與固定:
取動(dòng)物新鮮組織塊(一般厚度不超過(guò)0.5厘米)投入預(yù)先配好的固定液中(10%福爾馬林,Bouin氏固定液)使組織、細(xì)胞的蛋白質(zhì)變性凝固,以防止細(xì)胞死后的自溶或細(xì)菌的分解,從而保持細(xì)胞本來(lái)的形態(tài)結(jié)構(gòu)。

步驟二:脫水透明:
一般用由低濃度到高濃度酒精作脫水劑,逐漸脫去組織塊中的水份。再將組織塊置于既溶于酒精,又溶于石蠟的透明劑二甲苯中透明,以二甲苯替換出組織塊的中酒精,才能浸蠟包埋。

步驟三:浸蠟包埋:
將已透明的組織塊置于已溶化的石蠟中,放入溶蠟箱保溫。待石蠟完全浸入組織塊后進(jìn)行包埋:先制備好容器(如折疊一小紙盒),倒入已溶化的石蠟,迅速夾取已浸透石蠟的組織塊放入其中。冷卻凝固成塊即成。包埋好的組織塊變硬,才能在切片機(jī)上切成很薄的切片。

步驟四:切片與貼片:
將包埋好的蠟塊固定于切片機(jī)上,切成薄片,一般為5—8微米厚。切下的薄片往往皺折,要放到加熱的水中燙平,再貼到載玻片上,放45℃恒溫箱中烘干。

步驟五:脫蠟
常用HE染色,以增加組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)各部分的色彩差異,利于觀察。蘇木精(Hematoxylin,H)是一種堿性染料,可將細(xì)胞核和細(xì)胞內(nèi)核糖體染成藍(lán)紫色,被堿性染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜堿性。伊紅(Eosin,E)是一種酸性染料,能將細(xì)胞質(zhì)染成紅色或淡紅色,被酸性染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜酸性。染色前,須用二甲苯脫去切片中的石蠟,再經(jīng)由高濃度到低濃度酒精,最后入蒸餾水,就可染色。

步驟六:染色
HE染色過(guò)程是:
①將已入蒸餾水后的切片放入蘇木精水溶液中染色數(shù)分鐘。
②酸水及氨水中分色,各數(shù)秒鐘。
③流水沖洗1小時(shí)后入蒸餾水片刻。
④入70%和90%酒精中脫水各10分鐘。
⑤入酒精伊紅染色液染色2—3分鐘。

步驟七:脫水透明:
染色后的切片經(jīng)純酒精脫水,再經(jīng)二甲苯使切片透明。

步驟八:封固:
將已透明的切片滴上加拿大樹(shù)膠,蓋上蓋玻片封固。待樹(shù)膠略干后,貼上標(biāo)箋,切片標(biāo)本就可使用。
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