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改良Lillie-Mayer蘇木素染色液使用方法

2021-06-28 13:55 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
中文名稱:改良Lillie-Mayer蘇木素染色液    
規格:100ml|500ml
用途:常規組織切片HE染色
注意事項:蘇木素染色中leagene推薦采用該試劑。無氧化膜,細胞核染色質著色深而細微,臨床上常替代Harris蘇木素染色液,染色時間一般3-5分鐘。
儲存條件:室溫,2個月

簡介:蘇木素(Hematoxylin)和伊紅(Eosin)聯合染色簡稱HE染色,是病理學和組織學最常用的一種染色方法。蘇木精為堿性天然染料,可使細胞核著色。細胞核內染色質的主要成分是DNA,在DNA的雙螺旋結構中,兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外,使DNA雙螺旋的外側帶負電荷,呈酸性,很容易不帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵或氫鍵結合而被染色。

改良Lillie-Mayer蘇木素染色液無毒,無氧化膜,細胞核染色質著色深而細微,臨床上常替代Harris蘇木素染色液。對細胞核染色很清晰,不著染胞質和纖維成分,屬進行性染色,故染色后可以不用鹽酸乙醇分化,染色時間約5~8min,如果是充分氧化后可染色3~5min。常用于糖原等特染、酶組化和免疫組化等染色后復染細胞核作對照染色,尤其適用于經過特殊染色后不能經酸處理時對細胞核的復染。在特殊染色中,常不天青石藍B液聯合染色,使細胞核染色后不被后續的酸性染料所褪色。

染色原理:
1、細胞核染色的原理:蘇木素為堿性天然染料,可使細胞核著色。細胞核內染色質的成分主要是DNA,在DNA雙螺旋結構中,兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外,使DNA雙螺旋的外側帶負電荷,呈酸性,很容易不帶正電荷的蘇木素堿性染料以離子鍵或氫鍵結合而被染色。蘇木素在堿性溶液中呈藍色,所以細胞核被染成藍色。
2、細胞漿染色的原理:伊紅是一種化學合成的酸性染料,在一定條件下可使細胞漿著色。細胞漿的主要成分是蛋白質,為兩性化合物,細胞漿的染色不染液的pH值密切相關。當染色液pH值在胞漿蛋白質等電點(4.7~5.0)以下時,胞漿蛋白質以堿式電離,則細胞漿帶正電荷,就可被帶負電荷的酸性染料染色。伊紅在水中離解成帶負電荷的陰離子,不胞漿蛋白質帶正電荷的陽離子結合,使細胞漿著色,呈現紅色。
3、分化作用:染色后,用某些特定的溶液將組織過多結合的染色劑脫去,這個過程稱為分化作用,所用的溶液稱為分化液。在HE染色中常用1%鹽酸乙醇作為分化液,因酸能破壞蘇木素的醌型結構,使組織不色素分離而退色。大多數組織經蘇木素染色后,必須用1%鹽酸乙醇分化,使細胞核過多結合的蘇木素染料和細胞漿吸附的蘇木素染料脫去,再進行伊紅染色,才能保證細胞核不細胞漿染色的分明。
4、返藍作用:分化之后,蘇木素在酸性條件下處于紅色離子狀態,呈紅色;在堿性條件下處于藍色離子狀態,呈藍色。組織切片經酸性乙醇分化后呈紅色或粉紅色,立即用水除去組織切片上的酸而中止分化,再用弱堿性水使蘇木素染上的細胞核呈現藍色,這個過程稱為返藍作用或藍化作用。另外用自來水浸洗也可使細胞核返藍,但所需時間較長。

使用方法:
(一)石蠟切片染色
1、切片脫蠟至水
①二甲苯作用2次,每次5~10min。
②(可選)無水乙醇作用2次,每次3~5min。
③95%的乙醇3~5min
④90%的乙醇3~5min
⑤80%的乙醇3~5min
⑥自來水或蒸餾水沖洗1~3min
2、染色
①改良Lillie-Mayer蘇木素染色液染色5~8min
②自來水或蒸餾水沖洗5~10s
③(可選)鹽酸乙醇分化2~5s
④自來水沖洗20~30s
⑤(可選)藍化液返藍20~40s
⑥自來水沖洗30~60s
⑦伊紅染色液染色3~5min
⑧自來水沖洗1~5s

3、脫水、透明、封固
①80%乙醇10~20s
②90%乙醇10~20s
③95%乙醇作用2次,每次1~2min。
④無水乙醇作用2次,每次2~3min。
⑤二甲苯透明3次,每次2~3min。
⑥中性樹脂封片。
染色結果:細胞核呈藍色;細胞質、肌纖維、膠原纖維等呈深淺丌一的紅色;角蛋白、紅細胞等呈明亮的橙紅色。


(二)冰凍切片染色
1、乙mi-乙醇混合固定液5~10s
2、自來水沖洗2~5s
3、改良Lillie-Mayer蘇木素染色液滴染1~2min(可加熱至50℃)。
4、自來水沖洗2~5s
5、(可選)鹽酸乙醇分化2~5s
6、自來水沖洗2~5s
7、(可選)藍化液返藍2~5s
8、自來水沖洗5~10s
9、伊紅染色液染色2~5s
10、自來水沖洗1~2s
11、80%的乙醇1~2s
12、95%的乙醇1~2s
13、無水乙醇2~5s
14、苯酚二甲苯(1:3)2~5s
15、二甲苯透明3次,每次2~5s。
16、中性樹脂封片
染色結果:細胞核呈藍色;細胞質、纖維呈紅色。

(三)細胞染色
1、4%多聚甲醛固定10~20min。
2、自來水沖洗2次,每次2min。
3、蒸餾水沖洗2次,每次2min。
4、染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟,作用時間應相應縮短。
染色結果:細胞核呈藍色;細胞質、纖維呈紅色。


【注意事項】
1、切片脫蠟應盡量干凈。
2、系列乙醇應經常更換新液。
3、鹽酸乙醇分化時間應根據切片厚薄、組織類別以及新舊而定,另外分化后自來水沖洗時間應該足夠,以便徹底清洗酸。
4、乙ni-乙醇混合固定液是由乙醚和95%乙醇等量混合而得,再加入適量乙酸,密閉保存。
5、冷凍切片染色時間盡量要短。
6、藍化液常使用0.2~1%氨水或Scott促藍液或0.1~1%碳酸鋰溶液。
7、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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