1.如何純化免疫球蛋白G（IgG）？

免疫球蛋白G（IgG）是血清中免疫球蛋白主成分，約占血清中免疫球蛋白總含量的75%。血漿 B細(xì)胞可產(chǎn)生并釋放IgG分子，每個(gè)IgG具有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。

IgG包含4種不同的亞型：IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，它們的結(jié)構(gòu)類(lèi)似均由Fab區(qū)（上端，抗原結(jié)合區(qū)）、鉸鏈區(qū)和Fc區(qū)（下端，F(xiàn)c受體結(jié)合區(qū)）組成，在這4種IgG抗體亞型中，IgG1和IgG3與Fc受體的親和力高于IgG2和IgG4，具有更強(qiáng)的激活抗體依賴(lài)的細(xì)胞毒性（ADCC）和補(bǔ)體依賴(lài)的細(xì)胞毒性（CDC）的能力；而IgG2和IgG4亞型與Fc受體的結(jié)合力低，其作用主要表現(xiàn)在Fab端的抗原結(jié)合能力上，即阻礙或抑制的效應(yīng)功能。

2.如何純化免疫球蛋白M（IgM）？

IgM在Ig中分子量最大，通常稱(chēng)為巨球蛋白，占血清Ig總量的10%。在電子顯微鏡下觀察，IgM由五個(gè)基本結(jié)構(gòu)相同的單體組成。各單位間由一條連結(jié)鏈(J鏈)連結(jié)成“星狀”的五聚體。

IgM是在個(gè)體發(fā)育過(guò)程中最早產(chǎn)生的抗體，也是經(jīng)抗原刺激的動(dòng)物體內(nèi)最先出現(xiàn)的抗體，主要由脾臟和淋巴結(jié)中漿細(xì)胞分泌合成。

3.如何純化人免疫球蛋白A（IgA）？

IgA在正常人血清中的含量?jī)H次于IgG，占血清免疫球蛋白含量的10~20%。從結(jié)構(gòu)來(lái)看，IgA有單體、雙體、三體及多聚體之分。市場(chǎng)上由于缺乏合適和高容量的親和樹(shù)脂，IgA成為抗體純化的難題。

以下人IgA純化試劑盒和樹(shù)脂填料:

cat#LT-146KIT 人IgA純化試劑盒（含微型離心柱）

cat#LT-146 人IgA松散樹(shù)脂5ml

cat#LT-146-1x1ml 1mL人IgA純化預(yù)裝柱

特點(diǎn)：LigaTrap的IgA純化樹(shù)脂具有≥15mg IgA/mL樹(shù)脂的結(jié)合能力，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)了其他常用于IgA純化的凝集素樹(shù)脂的結(jié)合力，最重要的是，LigaTrap IgA純化樹(shù)脂不需要使用基于糖（半乳糖，蔗糖……）的洗脫緩沖液，因此簡(jiǎn)化了進(jìn)一步的下游處理。

4.如何純化雞免疫球蛋白Y（IgY）？

IgY，由兩條重鏈(H)和輕鏈(L)組成，重鏈(υ)由一個(gè)可變區(qū)(V)和4個(gè)恒定區(qū)(C)組成，沒(méi)有鉸鏈結(jié)構(gòu)。IgY普遍存在于鳥(niǎo)類(lèi)、爬行動(dòng)物和兩棲類(lèi)，在功能上等價(jià)于哺乳動(dòng)物IgG，但其許多生物學(xué)性質(zhì)仍未被發(fā)現(xiàn)。

近來(lái)許多研究者分析了IgY的基因組成和生物學(xué)功能，而且證實(shí)其為哺乳動(dòng)物IgG和IgE的直接起源。因?yàn)榭乖庖叩哪鸽u所產(chǎn)生的雞蛋黃中含有豐富的免疫球蛋白IgY，因此，雞正逐漸成為定制研究抗體來(lái)源的常用種屬。

5.抗體親和材料——Protein A

對(duì)于IgG的純化，除了介紹過(guò)的樹(shù)脂純化方法，大部分情況下我們都會(huì)選擇使用Protein A或Protein G進(jìn)行親和層析。因?yàn)樗鼈儗?duì)于IgG的Fc段具有特異性的親和作用，而對(duì)于其他雜蛋白沒(méi)有或者只有很弱的結(jié)合。

蛋白A (Protein A) (cat#7300-01S,Protein A-UNLB)來(lái)源于金黃色葡萄球菌的一個(gè)株系，它含有5個(gè)可以和抗體IgG分子的Fc段特異性結(jié)合的結(jié)構(gòu)域。Protein A作為親和配基被偶聯(lián)到瓊脂糖基質(zhì)上，可以特異性的和樣品中的抗體分子結(jié)合，而使其他雜蛋白流穿，具有極高的選擇性。1個(gè)Protein A分子至少可以結(jié)合2個(gè)IgG。

除了IgG，Protein A也可以結(jié)合另一些免疫球蛋白，如用于某些種屬的IgA、IgM的純化。重組Protein A的C-端新增一個(gè)Cysteine，可以單一位點(diǎn)定向偶聯(lián)于瓊脂糖基架上，降低與抗體接觸的空間位阻。

6.抗體親和材料——Protein G

對(duì)于IgG的純化，除了介紹過(guò)的樹(shù)脂純化方法，大部分情況下我們都會(huì)選擇使用Protein A或Protein G進(jìn)行親和層析。因?yàn)樗鼈儗?duì)于IgG的Fc段具有特異性的親和作用，而對(duì)于其他雜蛋白沒(méi)有或者只有很弱的結(jié)合。

蛋白G(Protein G)(cat#7406-01S ,Protein G-UNLB)是從G類(lèi)鏈球菌（Streptococci）中分離出來(lái)的胞壁蛋白，分子量25kDa。相對(duì)于Protein A，Protein G對(duì)于大多數(shù)哺乳動(dòng)物的IgG有著更高的親和力，尤其是對(duì)于IgG的亞基，如人 IgG3，小鼠IgG1和鼠 IgG2a。

因此，Protein G可用于純化不能與Protein A很好結(jié)合的哺乳動(dòng)物單抗和多抗IgG。

7.如何基于磁珠實(shí)現(xiàn)分離純化和富集？

Protein A通過(guò)共價(jià)偶聯(lián)到磁珠上形成的親和純化介質(zhì)，具有快速磁響應(yīng)性，高蛋白結(jié)合能力和低非特異結(jié)合，可與大多數(shù)哺乳動(dòng)物IgG的Fc片段特異性結(jié)合。

偶聯(lián)Protein A 的磁珠可快速有效地從腹水、血清或細(xì)胞培養(yǎng)液等生物樣品中分離和純化免疫球蛋白，也可通過(guò)抗原抗體結(jié)合從生物樣品中免疫沉淀靶蛋白。通過(guò)簡(jiǎn)單的磁性吸附即可輕松純化抗體或包含抗體Fc片段的基因工程重組蛋白。