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遠慕生物:微生物實驗室日常工作規范!

2021-08-03 10:59 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
為了規范微生物的日常工作,達到日常工作實事求是、及時準確、優質服務、質量至上的目標,保證日常工作的順利進行,做如下規定:
一、微生物檢測意識
樹立正確的無菌觀念和檢測人員的素質,是每一個微生物檢測人員應具備的素質,好的修養素質和積極的工作態度是保證結果準確的基礎,下面的規定規范都是為檢測服務的,如果檢測人員沒有好的素質,這些規定都是虛設,擺設;希望下面的規范是每位檢測人員想要做得,而不是強加在自己身上的緊箍咒。
①增強自己得生物安全意識,如何保護自己,如何保護樣品,如何無菌操作,有責任心。
②實驗原理,實驗原理是實驗的精髓,掌握它,就能夠對整個實驗更好的了解深入,學習研究。
③實驗條件的把握,對實驗的每個條件是否掌握清楚,實驗的關鍵控制點是否清楚。
④實驗結果的把握,一個實驗結果的出現,首先應該自我分析,并且具備這種分析能力,對異常如何處理或是進一步驗證。
⑤具備研究好學心態,檢測工作是一個相對只是含量較高的職業,高科技飛速發展的今天,許多當時的先進技術不久就陳舊落后,檢測工作也一樣,優秀的化驗員總是虛心好學,善于研究,總是處在科技的前沿。
⑥人員素質,積極向上,樂于助人,對工作負責,工作第一等,努力提高自己的工作質量。


二、微生物檢測
1.實驗前的準備
1.1無菌間
無菌間是微生物實驗的重要環節,關系到實驗結果的準確性,無菌間的使用規范要嚴格要求,保證實驗環境影響因素降到最低。
使用要求:
1、無菌間在使用前,必須先進行清理、臭氧殺菌時間50min或紫外燈殺菌30min。
2、檢測使用的器皿、樣品等物品的進出,通過緩沖窗進行傳遞,使用完畢后紫外燈殺菌30min,開傳遞窗時禁止兩邊同時打開。
3、檢測人員進入緩沖間后,先更換拖鞋、佩帶無菌帽和一次性口罩,更換衣服,并將其擺放整齊,方可進入無菌間。
4、進入無菌室過程中,依次打開和關閉各緩沖間的門,以避免空氣流通帶入外界的雜菌。
5、無菌操作前必須使用75%酒精對手部進行消毒,接種有害菌種時必須戴手套。
6、進行接種所用的吸管,平皿及培養基等必須經嚴格消毒滅菌,打開包裝未使用完的器皿,不能放置后再使用,金屬用具應高壓滅菌或用95%酒精點燃燒灼后使用,剪刀、鑷子至少每周進行一次高壓滅菌。
7、從包裝中取出吸管時,吸管尖部不能觸及外露部位,使用吸管接種于試管或平皿時,吸管尖不得觸及試管或平皿邊。
8、接種樣品、轉種細菌必須在酒精燈前操作,接種細菌或樣品時,吸管從包裝中取出后及打開試管塞都要通過火焰消毒。
9、接種環或針在接種細菌前應經火焰燒灼全部金屬絲,必要時還要燒到環和針與桿的連接處,接種結核菌和烈性菌的接種環應在沸水中煮沸5min,再經火焰燒灼。
10、吸管吸取菌液或樣品時,應用相應的橡皮頭吸取,不得直接用口吸。
11、檢驗結束后,所有帶菌的培養基、試劑、稀釋液和器皿必須盡快清理出無菌間滅菌洗刷。
12、檢驗結束后,人員離開無菌間前,須將無菌間的衛生徹底清理、并用紫外燈進行殺菌。
13、無菌間所用工器具(剪刀、鑷子、膠頭、涂抹棒、托盤盒等)使用完畢后,擺放整齊。
14、滅菌后的無菌間懸掛“已滅菌”標識,正在使用的無菌間要懸掛“使用中”標識。防止檢測人員在未經過滅菌的無菌間中進行微生物檢測。


其它注意事項:
1.  禁止在無菌間內打手機,由于業務需要可在緩沖間內打手機。
2.  實驗過程中穿著整齊,不要出現露頭發、鼻孔等現象,禁止在無菌間打鬧、喧嘩。
3.  實驗過程中,物品要擺放整齊,實驗產生的垃圾要單獨存放不要亂放,防止污染實驗樣品。
4.  紫外燈每周五打掃衛生時要用酒精棉球擦拭,防止灰塵阻擋影響殺菌效果。

1.2實驗器具
實驗器具是微生物實驗的一個關鍵控制點,實驗器具的無菌是保證實驗結果準確的重要因素。
①培養皿,首先應確認是否經過消毒,確認后進行外觀檢查,觀察是否有破損,有破損處廢棄。滅過菌的平皿最多保存一周時間。打開的平皿整齊的擺放到實驗臺上備用,發現有破裂的平皿應廢棄;使用時看是否有平皿內部存有雜質、培養基等異物也應立即廢棄。
②玻璃器皿,新購置玻璃器具因含有游離堿,應在清潔液或2%鹽酸內浸泡24小時,再用蒸餾水清洗。檢驗沾染的油跡、污濁物等器具可用10%NaOH浸泡1小時后,用清水沖洗干凈。每周洗刷盛生理鹽水的三角瓶子,防止水垢太厚影響滅菌和微生物生長。
③實驗完畢后,使用的實驗器具應立即清洗消毒,防止微生物增長污染或者傷害到人員。所有衛生用具如拖把、掃帚、抹布、垃圾桶等都要根據污染區、清潔區、無菌區要求嚴格區分開、并專用,不得相互混淆,衛生用具每周定量用1:20次氯酸鈉液消毒浸泡、清洗、涼干,以免污染。
④在進行各種檢驗時,應避免污染;遇有場地、工作服等污染時,應立即處理,防止細菌擴散以免造成污染。凡吸過菌液的吸管或滴管或染菌的培養皿,應立即放入盛有消毒液的容器內或高壓滅菌處理。工作人員必須每天堅持做好環境衛生工作,防止灰塵飛揚,定期對整個操作環境進行消毒。

1.3藥品的使用
微生物藥品是微生物實驗的一個關鍵控制點,培養基質量的關系到檢測結果準確的重要因素。
①藥品的采購,實驗藥品缺少時,由藥品管理員上計劃。微生物藥品常規藥品按“箱”進行計算,不常用藥品按“瓶”進行計算,生化鑒定管按“支”進行計算,每種保留至少1個單位庫存量。
②藥品取用,藥品取用時到藥品管理員取鑰匙,取用后將藥品柜鎖死,并將鑰匙歸還給藥品管理員。取用人員發現藥品低于1個單位庫量時,及時通知藥品管理員。
③將近過期藥品(2個月),生化鑒定管可以退貨,其他藥品抓緊時間使用,過期藥品廢除。
④新藥品使用時,應注意檢查包裝是否有破損?粉末狀藥品是否有結塊?有無雜質?有無變色等異常。
⑤藥品稱量按照使用要求配制,并填寫藥品配制記錄。
⑥配制好的藥品按照滅菌要求進行,含糖的培養基滅菌總時間不超過45min,滅菌后觀察培養基的顏色、容量等,并搖勻培養基,放置瓊脂沉淀到底部。
⑦培養基使用前,按要求進行溶解,在溶解過程中要防止二次污染和溶解不充分;溶解后放到45~50度,放置備用時間不超過4h。
⑧使用時,進行冷卻溫度控制到45度左右,過高容易殺死微生物,過低培養基凝固。
⑨傾倒培養基時應注意無菌操作,并搖勻培養基。傾倒過多,培養基過厚需氧環境不好,過薄培養基容易干裂影響檢測結果,配制培養基盡可能按照樣品量進行配制,使用后的培養基根據情況廢棄或保存。

1.4滅菌鍋的使用
滅菌鍋屬于高壓滅菌容器,安全性和滅菌效果是控制的重點,使用規范如下:
安全事項:由于滅菌鍋屬高壓容器,壓力表要及時計量,操作過程中人員不得離開現場,如有異常問題及時通知相關人員,機修,管道。
①檢查高壓滅菌鍋的外觀是否正常,壓力表、溫度計是否歸零,各管路閥門是否為關閉狀態。
②排放物品,注意不要過滿;關鍋并將標示牌轉到已滅菌,調節閥打到排氣狀態。
③打開總閥門,打開排水法,進行管道排水,約1-2min當聽到無水聲時,關閉排水法。
④打開進氣閥和出氣閥,進行排氣,此過程是對鍋內空氣進行排氣,防止空氣存在影響滅菌效果。
⑤排氣等夾層壓力達到0.5Mpa,將調節閥調到滅菌狀態進行滅菌,培養基121℃15min;其他特殊培養基安滅菌要求進行滅菌。注意事項由于溫度為手控,所以滅菌過程中要注意溫度的變化。
⑥滅菌完畢后,填寫滅菌記錄,并關閉進氣閥,排氣閥不用關閉,并等溫度降低60度左右,壓力降到0;如果壓力過大時開鍋有可能打不開,另一個容易造成液體倒吸使瓶塞蹦出。
⑦開鍋后,及時將培養基取出搖勻后冷卻,物品取出后負責人要及時清鍋,防止其他物品污染滅菌物品。
⑧滅菌結束后,將排水閥打開,防止管道積水。


其他注意事項:
①溫度計無變化:1.溫度計損壞,2.電源未打開,3.探針堵塞,4.調節閥損壞不進氣。
②鍋門打不開:1.壓力過大,2.調節閥損壞,內部負壓。
③管道漏氣:找管道維修。
④滅菌鍋的每周清潔污物及凝結水同時清洗;滅菌鍋要保持干凈并無殘留物(尤其濾器)以防止生銹保證最大熱傳遞和橡膠用具以蒸沸15min滅菌為宜,高溫高壓處理易失去彈性。
⑤容積控制:采取稱中法測定蒸發量,體積100vml稀釋起重量為101vg,高壓夠體積偏差不超過1%。

1.5培養箱的使用
培養箱的溫度、濕度控制是微生物控制的關鍵點。使用規范如下:
①外觀檢查,有無噪音,是否放平穩,有無故障。
②檢查溫度設置是否為檢測要求溫度?顯示溫度與設定溫度是否在允許波動范圍內。
③為了保持培養箱內部濕度,可在培養箱內放一個盛水的小燒杯,防止培養基干燥。
④培養箱內物品擺放整齊,但不要過緊密,防止溫度,空氣等環境之間的差異對檢測結果的影響,并關好箱門(輕開輕關)。
⑤每天對培養箱內溫度計和顯示溫度進行比較,填寫儀器設備使用記錄,對較大差異的查找原因進行處理。
⑥保持好培養箱內衛生,對有異味的培養箱進行通氣,并每周對培養箱進行消毒殺菌,培養后的平皿及時清理,防止霉菌或其他微生物累積。
⑦冰箱每周進行除霜清理,存放的物品做好記錄,對不用的物品及時清理。


三、樣品接收
2.1送檢樣品的處理
微生物接受樣品,就是檢驗工作開始之時,樣品接收、交接環節是檢驗工作的第一環節,關系到檢驗工作質量和效率。
為了真實的反應車間加工產品的質量情況,正確的指導車間生產。具體措施如下:
化驗員到車間自取樣品,保證每個車間每周1個樣品,并在化驗結果后備注“自取”。另外有特殊情況可增加取樣量,微生物考核時按正常樣品計算,在自取樣品欄里填寫。
2.2樣品運輸
個人車間樣品由自己取,便于與車間交流溝通,掌握產品信息和工藝,對微生物檢測判斷有幫助。微生物樣品運輸過程中必須采用保溫袋,防止溫度變化;另外運輸過程中樣品不要落地,防止袋子破損污染樣品。
2.3樣品保存
冷凍品按要求進行解凍,干燥食品可放在常溫冷暗處,易腐和冷卻樣品應放入10℃環境。冷凍樣品來不及檢驗應放入-15℃以下冰箱內。
原則上冷凍樣品取出后,按包裝原樣在室溫下自然解凍;也可在0-4℃環境解凍,時間不超過18小時;也可在溫度不超過45℃環境中解凍,時間不超過15min。
2.4樣品制備
根據樣品不同性狀、類型的食品,進行適當處理,盡可能的保證均勻取樣。或按照檢測方法進行樣品處理。


四、日常工作
1。文件資料及物品的規定
為了規范微生物資料管理,起到工作有秩序的目的,防止重要資料丟失。特對資料整理規定如下,希望大家嚴格執行,為我們創造一個良好的工作環境。
2.個人桌面
1.原始記錄夾子要有對應車間的標簽,沒有的可向組長索要打印一張,不要出現標簽與內容不符的現象。
2.個人資料必須放到夾子里面,不要在桌面出現裝訂紙張。
3.原始記錄、抽取單不要隨意亂放,防止客戶參觀時隨意翻看,泄漏客戶機密,記錄完畢后,要整齊放到辦公室夾子座里面。
4. 其它資料包括書籍等要放到小柜里,借閱、歸還時要到資料管理員簽字,借閱的書籍也不要亂放,看完后要整齊放在辦公室桌子,禁止放到實驗區(可在實驗區閱讀)。
5. 有單頁報告單或者其他資料時,可放到插頁夾子里,每組一個,桌面不要出現單頁紙。
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