深低溫保藏的細(xì)胞十分脆弱，要輕柔操作。快速解凍深低溫保藏的細(xì)胞，然后直接將其接種到完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，如果細(xì)胞對(duì)抗凍劑（DMSO或甘油）特別敏感，則離心除去抗凍劑，然后將細(xì)胞接種到完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。下面是深低溫保藏細(xì)胞的建議解凍步驟：

直接接種法

1．從凍存管中取出細(xì)胞，用37℃水浴快速解凍。

2．將細(xì)胞直接接種到完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。每毫升凍存細(xì)胞需要10-20ml完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基。計(jì)算活細(xì)胞的個(gè)數(shù)。細(xì)胞接種量至少要達(dá)到3X105 活細(xì)胞/ml。

3．將細(xì)胞培養(yǎng)12-24h。更換新鮮完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基以去除抗凍劑。

離心法

1．從凍存管中取出細(xì)胞，用37℃水浴快速解凍。

2．將1-2ml 凍存細(xì)胞接種到大約25ml完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。要非常輕柔地進(jìn)行混合。

3．用大約80 X g的速度離心2-3分鐘。

4．吸除上清液。

5．用完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基輕輕重懸解離下來的細(xì)胞，并計(jì)算活細(xì)胞的個(gè)數(shù)。

6．接種細(xì)胞。細(xì)胞接種量至少要達(dá)到3X105 活細(xì)胞/ml。