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單細(xì)胞分離的特點(diǎn)應(yīng)用以及小技巧

2021-09-06 11:19 作者:洛辰 來(lái)源:上海遠(yuǎn)慕生物試劑

單細(xì)胞分離采用類似噴墨打印機(jī)以及一次性分配分離槽,溫和高效地接種單細(xì)胞,使用明場(chǎng)高分辨率成像或可選熒光分選細(xì)胞,每個(gè)單細(xì)胞分離捕獲 5張圖像,單克隆性,提高工作效率,保持并增強(qiáng)細(xì)胞活率,且防止交叉污染。

采集單細(xì)胞分離的證據(jù),在接種細(xì)胞時(shí)記錄5張連續(xù)圖像,以96或384孔板的形式提供直接的單克隆性圖像證據(jù),提高克隆形成率,與傳統(tǒng)方法相比,在克隆形成率上可實(shí)現(xiàn)高達(dá)8倍的提升。

保持細(xì)胞健康和無(wú)菌,正如克隆生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)所見(jiàn),通過(guò)溫和的分離維持細(xì)胞活性,并使用無(wú)菌的一次性單向分離槽防止交叉污染,簡(jiǎn)便、快速、可選擇以及無(wú)損分離單細(xì)胞,簡(jiǎn)化遺傳和克隆培養(yǎng)、分析中分離過(guò)程。快速高效接種單個(gè)活細(xì)胞至微孔板分離系統(tǒng)的主要功能為高效柔和地分離或分選活的單細(xì)胞。該系統(tǒng)通過(guò)微流控技術(shù)柔和地形成細(xì)胞液滴,同時(shí)利用白光和熒光成像實(shí)時(shí)分析細(xì)胞數(shù)量和熒光強(qiáng)度,將符合要求的單細(xì)胞液滴準(zhǔn)確接種至96孔板。

主要特點(diǎn)
1.分離效率>85%,單細(xì)胞活率>75%;
2.記錄分離前后的連續(xù)5張圖像,用于支持細(xì)胞株的單克隆性;
3.采用一次性分離槽,省卻系統(tǒng)的清洗驗(yàn)證,減小交叉污染的風(fēng)險(xiǎn);
4.采用白光成像和熒光成像,可根據(jù)細(xì)胞直徑、圓度以及熒光強(qiáng)度篩選出感興趣的細(xì)胞;
5.內(nèi)置除靜電裝置,消除微孔板靜電,確保細(xì)胞液滴接種至微孔正中間,尤其是PCR板。

單細(xì)胞分離系統(tǒng)可代替?zhèn)鹘y(tǒng)的有限稀釋法,高效地將單個(gè)活細(xì)胞接種至微孔板中。得益于分離系統(tǒng)的高效率和高活率,可以將每塊微孔板中可獲得的單克隆細(xì)胞團(tuán)提高至多8塊,從而在相同的工作量下可篩選更多的細(xì)胞克隆,從中發(fā)現(xiàn)更多更優(yōu)質(zhì)的細(xì)胞株。分離過(guò)程中記錄的連續(xù)5張圖像,可以與后續(xù)的孔板成像的圖像證據(jù)互相補(bǔ)充,從而提高單克隆性的可信度。

應(yīng)用范圍:連接不同管徑大小的毛細(xì)玻璃針,可分離捕獲各種非貼壁狀態(tài)的單細(xì)胞和微粒等,如細(xì)菌、酵母、藻類細(xì)胞、植物花粉、原生動(dòng)物單細(xì)胞、懸浮細(xì)胞、血液細(xì)胞、免疫細(xì)胞、卵細(xì)胞、各種懸液中單細(xì)胞及特殊標(biāo)記的單細(xì)胞等。

單細(xì)胞分離的小技巧
1. 縮短制備單細(xì)胞懸液的時(shí)間,以保留細(xì)胞活力
2. 考慮使用細(xì)胞篩來(lái)過(guò)濾出細(xì)胞團(tuán)塊或雙細(xì)胞
3. 注意緩沖液的選擇,包括分選和收集溶液
4. 如果您打算在分選后培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)使用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,并確定最佳培養(yǎng)條件
5. 在分選轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞時(shí),通常在轉(zhuǎn)染后72小時(shí)進(jìn)行,以提高細(xì)胞群的生存能力
6. 如果采用熒光抗體來(lái)分離稀有細(xì)胞,請(qǐng)?jiān)谌旧半x心抗體,以便去除任何可能被誤認(rèn)為是靶細(xì)胞的熒光顆粒
7. 對(duì)于單細(xì)胞基因組學(xué)應(yīng)用,在分選后別忘了離心平板,以確保細(xì)胞在孔的底部
8. 選擇一種可靠的分析技術(shù)來(lái)評(píng)估分選細(xì)胞的數(shù)量和質(zhì)量
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