一抗的選擇要點(diǎn)和技巧,必看!
2021-09-08 9:56 作者:洛辰 來源:上海遠(yuǎn)慕生物試劑
免疫組化實(shí)驗(yàn)是一種很嚴(yán)密的實(shí)驗(yàn),對抗體的選擇哪也有很高的要求,免疫組化所有的抗體主要是一抗,如何選擇免疫組化中的一抗?下面我們就來了解下。
(1)選擇單克隆還是多克隆抗體。由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體,單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一特異抗原決定簇結(jié)合,就象導(dǎo)彈精確地命中目標(biāo)一樣。另一方面,即使是同一個(gè)抗原決定簇,在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆產(chǎn)生抗體,形成好幾種單克隆抗體混雜物,稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應(yīng)中,一般單克隆抗體特異性強(qiáng),但親和力相對小,檢測抗原靈敏度相對較低;而多克隆抗體特異性稍弱,抗體的親和力強(qiáng),靈敏度高,但易出現(xiàn)非特異性染色(可以通過封閉等有所避免)。
(2)種屬來源。一般家兔來源的抗體多是多克?。欢∈髞碓吹目贵w多是單克隆,但也有另外。這條主要要與后面的二抗來源相匹配。
(3)實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖菣z測什么種屬的抗原,即species reactivity。這一點(diǎn)很重要,一般說明書上都有注明,如小鼠Ms、大鼠Rat、人Hum等等。
(4)能否做免疫組化。一般一抗說明書都會(huì)注明做WB、IHC、ICC、IF等,建議最好選擇注明的抗體,因?yàn)橐话愣际墙?jīng)過文章證明。
(5)檢測標(biāo)本類型。用于檢測石蠟切片還是冰凍切片,一般能做石蠟切片的抗體,可能都可以用來檢測冰凍切片,但能做冰凍切片的抗體,不一定能檢測石蠟切片中的抗原。
(6)生產(chǎn)廠家。國外著名抗體生產(chǎn)商原裝抗體質(zhì)量一般沒問題,但有點(diǎn)貴;而國內(nèi)分裝廠家用的一抗工作液,價(jià)格便宜,但有時(shí)結(jié)果的穩(wěn)定性和重復(fù)性稍差,尤其不同批次重復(fù)性較差。
(7)價(jià)格與質(zhì)量的矛盾。一抗原裝質(zhì)量可能會(huì)好點(diǎn),因?yàn)樵S多一抗避免反復(fù)凍融,且在稀釋液中穩(wěn)定性較差(若時(shí)間長),但價(jià)格較貴。