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酸性磷酸酶染色液(偶氮偶聯法)說明書

2021-09-24 13:32 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
中文名稱:酸性磷酸酶染色液(偶氮偶聯法)
規格:2×50ml
分類:酶類染色
儲存方式:4℃,避光,6個月
產品用途:細胞和組織的酸性磷酸酶染色
注意事項:主要由萘酚、六氮化對品紅、亞硝酸鈉等組成,染色后酶活性部位呈紅色。

產品簡介:
酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)分布極廣泛,遍布各種組織,主要存在于細胞的溶酶體內,所以常作為溶酶體標志酶。溶酶體外的酸性磷酸酶存在于內質網和胞質內。各種動物中的酸性磷酸酶各有不同,酸性磷酸酶的適宜pH 為4.5~5.5。酸性磷酸酶染色液(偶氮偶聯法)以萘酚AS-BI 為底物,在酸性pH 下被酸性磷酸酶水解釋放出磷酸和萘酚,萘酚與重氮鹽偶聯生成有色產物,定位于細胞質中。對某些酸性磷酸酶來講,Cu2+、酒石酸根離子和四氯化碳以及醛類也都是抑制劑,Mn2+為該酶的激活劑。多用于新鮮血涂片、細胞涂片、冰凍切片等,亦可用于石蠟切片。

自備材料:
1、 蒸餾水、恒溫箱
2、 載玻片、推玻片
3、 光學顯微鏡

操作步驟 (僅供參考):
(一)血液、細胞涂片:
1、 推片:取新鮮血液或骨髓涂片置于載坡片上,推玻片于載玻片保持30度,置于血液或細胞滴液
的正前方,稍往后移與血液或細胞滴液接觸使后者沿推片下緣散開,再勻速沿載玻片平面平穩
向前滑動至鋪滿血膜為止。
2、 自然晾干,ACP固定液4°C固定30s~3min,多數情況下30~60s即可。
3、 水洗,稍微晾干(不易過分干燥)。
4、 切片入ACP 孵育液,置于37°C溫箱,避光浸染45~60min,水洗。
5、 復染:蘇木素染色液染色5min或甲基綠染色液染色2~3min。
6、 水洗、晾干、鏡檢。

(二)冰凍切片:
1、 冰凍切片回溫至37°C,水中浸泡1~2min。
2、 自然晾干,ACP固定液4°C固定1~3min。
3、 水洗,稍微晾干(不易過分干燥)。
4、 切片入ACP孵育液,置于37°C溫箱,避光浸染45~60min,水洗。
5、 復染:蘇木素染色液染色5~8min或甲基綠染色液染色2~3min。
6、 水洗、晾干、鏡檢。

(三)石蠟切片:
1、 石蠟切片脫蠟5~10min,重復一次。
2、 無水乙醇5min,90%乙醇和70%乙醇各2min。
3、 水洗2min。
4、 自然晾干,ACP 固定液4°C固定30s~3min,多數情況下30~60s即可。
5、 水洗,稍微晾干(不易過分干燥)。
6、 切片入ACP 孵育液,置于37°C溫箱,浸染45~60min,水洗。
7、 復染:蘇木素染色液染色5~8min或甲基綠染色液染色2~3min。
8、 水洗、晾干、鏡檢。

染色結果:
陽性顆粒 紫紅色
細胞核 藍色(蘇木素)或綠色(甲基綠)

臨床意義:
1、白血病的毛細胞ACP染色呈強陽性或中度陽性,且不被酒石酸抑制。
2、急性白血病幼單核細胞ACP染色呈陽性,原淋巴細胞呈弱陽性,原粒細胞對ACP反應不一。
3、T淋巴細胞ACP染色呈陽性,顆粒粗大、分布密集。B淋巴細胞呈陰性或顆粒細小的弱陽性。
4、戈謝細胞呈強陽性,尼曼-皮克細胞呈陰性或弱陽性。

注意事項:
1、ACP孵育液易失效,本法宜用皮膚穿刺血涂片,晾干后應及時染色
2、對冰凍切片染色時,應減少切片在室溫暴露的時間。
3、樣本需新鮮,取材后應立即處理,否則會影響酶的活性。
4、組織固定需在4°C冰箱進行,時間不宜超過24h,否則酶活性會減弱或消失。
5、組織在石蠟包埋時,溫度不宜高于56°C。應使用熔點為52~54°C的石蠟進行浸蠟,浸蠟時間要短,否則酶活性會減弱或消失。
6、不純的二甲苯會分解黑色沉淀,宜選用AR級以上的二甲苯。
7、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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