細胞分選在多種研究領域都有涉及，例如腫瘤學，神經(jīng)生物學，免疫學等。但是大家對它們的優(yōu)缺點可能不太清楚，那今天遠慕生物在這里跟大家聊一下流式分選的原理、應用及與磁珠分選的區(qū)別。
流式細胞儀分選原理

當經(jīng)熒光染色或標記的單細胞懸液放入樣品管中，被高壓壓入流動室內(nèi)。流動室內(nèi)充滿鞘液，在鞘液的包裹和推動下，細胞被排成單列，以一定速度從流動室噴口噴出。在流動室的噴口上配有一個超高頻的壓電晶體，充電后振動，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴，待測細胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正、負不同的電荷，當液滴流經(jīng)過帶有幾千伏的偏轉(zhuǎn)板時，在高壓電場的作用下偏轉(zhuǎn)，落入各自的收集容器中，沒有充電的液滴落入中間的廢液容器，從而實現(xiàn)細胞的分離。

1.先制備單細胞懸液（可檢測多種樣本的單細胞懸液：外周血、骨髓、細胞穿刺液、洗脫液、實體組織、培養(yǎng)細胞等，如果是無菌實驗應該注意無菌操作）
2.樣本染色：調(diào)節(jié)電壓與選取目的細胞群（分選前應該做一個預實驗，優(yōu)化儀器的測定條件，建立分選門）
3.細胞分選與收集

流式分選的應用

1.細胞增值、活性和凋亡研究
2.疾病細胞如炎癥細胞、腫瘤細胞等的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸研究
3.基因表達和表達調(diào)控研究
4.細胞內(nèi)信號傳導和生物大分子間相互作用研究
5.各種病原體如病毒、細菌等基礎和致病性和致病機理研究
6.藥理藥效和藥物開發(fā)研究
7.移植和細胞治療研究
8.生物材料對細胞結(jié)構、活性和功能的影響

利用儀器的分選功能分選得到高純度、高活性的稀有細胞，通過直接培養(yǎng)、誘導、增殖、分化、活化和移植等進行更深一步的細胞功能和細胞治療探索，還可以在此基礎上逆向進行基因組合蛋白質(zhì)組相關研究，尋找致病基因、致病蛋白和疾病信號傳導方式。

影響流式分選的因素
1.分選速度：振蕩頻率（頻率越高，速度越快）、鞘液壓力、噴嘴大小、上樣速度(速度過快，得率會降低，故應該按實驗需求來設定)
2.分選純度：精確設定液滴延遲時間（跑微球去矯正）、保證液流穩(wěn)定、選擇合適的分選模式、排除樣本粘連、合理設門（用散點圖）、合理閾值設定
3.分選得率：液滴延遲時間要準確、液流穩(wěn)定、如果不考慮純度的情況下（不需后續(xù)培養(yǎng)），可以選擇Enrich/yield分選模式
4.分選活性：細胞本身的活性、儀器潔凈程度、鞘液壓力、噴嘴大小（對于脆弱細胞，盡量采用低壓和大噴嘴，包裹細胞的液滴越大，對細胞的沖擊越小）、上樣管路設計及管壁光滑程度

免疫磁珠法分離細胞原理

是基于細胞表面抗原能與連接有磁珠的特異性單抗相結(jié)合，在外加磁場中，通過抗體與磁珠相連的細胞被吸附而滯留在磁場中，無該種表面抗原的細胞由于不能與連接著磁珠的特異性單抗結(jié)合而沒有磁性，不在磁場中停留，從而使細胞得以分離。

免疫磁珠法分為正選法和負選法：

正選法：磁珠結(jié)合的細胞就是所要分離獲得的細胞
負選法：磁珠結(jié)合不需要的細胞，游離于上清液的細胞為所需細胞

磁分離細胞的重要指標是：

1.純度和得率，這取決于磁珠所連接單抗的特異性和磁珠大小（磁性），然而太小的磁珠得率不高，太大的磁珠又會影響細胞活性，也無法直接上流式。
2.磁珠大小約為200nm為中等大小磁珠
3.小磁珠的優(yōu)點是對細胞溫和，不影響分離細胞的后續(xù)培養(yǎng)，可直接上流式檢測，不影響散射光；缺點是需要很強的磁場來分離細胞，分離速度慢，得率不高，需要一次性的分離柱，不能在普通試管進行，成本昂貴。
4.大磁珠的優(yōu)點是技術簡單，分離可在試管中完成，易于增減細胞用量，速度快，得率高，成本低；缺點是對細胞造成機械壓力，影響其生物學活性，不利于分離后培養(yǎng)，純度低，阻塞FCM的噴嘴。