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產(chǎn)品分類

考馬斯亮藍(lán)快速染色液操作步驟

2021-12-28 13:35 作者:洛辰 來(lái)源:上海遠(yuǎn)慕生物試劑
產(chǎn)品名稱:考馬斯亮藍(lán)快速染色液
規(guī)格:100ml/500ml
分類:蛋白檢測(cè)
儲(chǔ)存條件:4℃,避光,12個(gè)月
用途:SDS-PAGE或非變性PAGE等蛋白電泳膠的快速、高靈敏染色,或Western轉(zhuǎn)膜后PAGE膠上殘余蛋白的檢測(cè),同時(shí)進(jìn)行凝膠固定和染色,而且不需要脫色液。
注意事項(xiàng):主要由G250、弱酸、去離子水等組成,無(wú)需固定,無(wú)需脫色液。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
考馬斯亮藍(lán)快速染色液(Commassie Blue Fast staining solution)是以考馬斯亮藍(lán)G250為染料可用于SDS-PAGE或非變性PAGE等蛋白電泳膠的快速染色,亦可用于Western轉(zhuǎn)膜后PAGE膠上殘余蛋白的檢測(cè)。
考馬斯亮藍(lán)快速染色液采用自主研發(fā)的技術(shù),在傳統(tǒng)考馬斯亮藍(lán)快速染色液的基礎(chǔ)上進(jìn)行改良,是一種無(wú)毒的染色液,快速染色液只需1h,可以檢測(cè)低達(dá)100ng的蛋白電泳條帶。其核心優(yōu)點(diǎn)在于:無(wú)需對(duì)凝膠進(jìn)行固定,無(wú)需煮沸,無(wú)需脫色,染色時(shí)間短,操作更加簡(jiǎn)單。

自備材料:
1、水平搖床或側(cè)擺搖床
2、蒸餾水
3、(可選)加熱裝置
4、20%甘油水溶液

操作步驟(僅供參考):
1、PAGE電泳結(jié)束后取凝膠放入約50~100ml蒸餾水中,在搖床上搖動(dòng)5min,棄液,重復(fù)上述步驟1次。
2、棄蒸餾水,加入3~5倍體積以上的Commassie Blue Fast staining solution,使染色液能蓋住凝膠。
3、(可選)凝膠置于考馬斯亮藍(lán)快速染色液中,在水浴鍋或微波爐內(nèi)加熱至95~100℃,立即從加熱裝置中取出。(此步驟可以使染色提高靈敏度或加快染色進(jìn)程,亦可省略。)
4、在搖床上搖動(dòng)染色,蛋白量大的條帶10~15min左右會(huì)出現(xiàn),大部分蛋白條帶會(huì)在30~60min 左右出現(xiàn)。一般情況下,5h能獲得效果。
5、出現(xiàn)清晰的目標(biāo)蛋白條帶即可停止染色,棄染色液。
6、加入適量的蒸餾水停止染色反應(yīng)。亦可以在搖床上搖動(dòng)脫色5~10min,以便減少背景干擾。
7、把凝膠保存在水中,用于后續(xù)的拍照等。保存在水中的凝膠會(huì)發(fā)生溶漲。如需避免溶漲,可以把膠保存在含20%甘油水溶液中,長(zhǎng)期保存可以制備干膠。

注意事項(xiàng):
1、PAGE電泳后凝膠采用蒸餾水清洗的目的在于去除凝膠中的SDS等干擾物質(zhì)。如果不能充分去除SDS會(huì)導(dǎo)致背景較高。如果凝膠很厚,洗滌時(shí)間應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)、洗滌次數(shù)應(yīng)適當(dāng)增加。蒸餾水洗滌去除凝膠中的雜質(zhì)時(shí),如果使用經(jīng)過(guò)加熱或沸騰的蒸餾水,每次洗滌時(shí)間可以縮短至 1~2min。
2、染色時(shí)如果把凝膠和染色液一起放置在微波爐中適當(dāng)加熱,可以大大加快染色速度。但加熱時(shí)宜盡量避免沸騰,以免出現(xiàn)因暴沸而導(dǎo)致的凝膠碎裂。
3、如果希望染色的背景更低,希望獲得更加清晰的蛋白條帶,可以加入適量的室溫蒸餾水進(jìn)行洗滌。通過(guò)蒸餾水洗滌可以進(jìn)一步降低背景。在4℃蒸餾水中浸泡一段時(shí)間可以獲得背景更低,條帶更清晰的條帶。在次日對(duì)4℃蒸餾水浸泡一段時(shí)間的已經(jīng)進(jìn)行了染色的凝膠再同前一天一樣進(jìn)行染色和洗滌可以進(jìn)一步改善染色效果,獲得更好的染色蛋白條帶。
4、本染色液呈酸性,有輕微腐蝕性,使用時(shí)請(qǐng)作必要防護(hù)。
5、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

常見(jiàn)問(wèn)題:
1、無(wú)染色條帶:可能上樣量太少,建議電泳時(shí)加適當(dāng)量的BSA等作為陽(yáng)性對(duì)照。
2、背景太高:可能雜質(zhì)沒(méi)有除盡,建議延長(zhǎng)zui初的蒸餾水洗滌時(shí)間或增加洗滌次數(shù)。也可以在完成染色后,把凝膠放置在蒸餾水中在室溫或4℃進(jìn)行洗滌。在4℃蒸餾水中浸泡一段時(shí)間,通常可以取得較好的脫色效果。
3、染色條帶的靈敏度不夠理想:可以使用考馬斯亮藍(lán)快速染色液進(jìn)行重復(fù)染色,重復(fù)染色可以改善染色效果。在加熱情況下染色可以顯著提高檢測(cè)靈敏度,另外染色后在室溫或4℃用蒸餾水進(jìn)行脫色也可以顯著改善染色的靈敏度。

有效期:12個(gè)月有效。
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