CM葡聚糖凝膠C-25操作步驟
2021-12-30 14:47 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
產品名稱:CM葡聚糖凝膠C-25
英文名稱:CM Sephadex C-25
CAS:62886-59-3
規格:25g/100g
保存:用過的產品應密封貯存在4℃(保存溶液為20%乙醇),通風、干燥、清潔的地方。不能冷凍。用過的柱子貯存在4℃(20%乙醇)。未使用的產品密封保存。
葡聚糖凝膠C-25是顆粒狀,使用時需要溶脹,其溶脹比取決于所使用的緩沖溶液,不同溶液中的溶脹比不同,而且存在較大差異。溶脹時不能使用磁力攪拌,否則易導致凝膠破碎。
預處理:
稱取所需量的葡聚糖凝膠C-25,置于 50~100 倍蒸餾水或者上樣平衡液中,溶脹,室溫條件下一般需要溶脹1~2天,沸水中一般需要2小時。
按每克葡聚糖凝膠C-25加0.5(MHCl)15ml的比例,將葡聚糖凝膠C-25浸泡于0.5M、HCl中,攪勻,靜置30分鐘,裝入布氏漏斗(墊有2層濾紙)中抽濾,并反復用蒸餾水抽洗至pH呈中性;然后以0.5M、NaOH同上操作過程處理,最后0.5M、HCl再處理一次。
裝柱:裝柱按照標準操作規程操作。必須保證每種材料都處于工作溫度,凝膠裝柱前需要脫氣 。
平衡:使用2~5倍柱床體積的上樣平衡液平衡柱子,務必使流出液的電導和pH同上樣緩沖液的電導和pH完全一致。
上樣:根據目標產物濃度和凝膠的載量確定上樣量。
清洗:上樣完畢后,再使用上樣緩沖液平衡柱子,清洗掉不結合的蛋白和雜質,直至流出液的電導和pH同上樣緩沖液的電導和pH完全一致。
洗脫:使用增大緩沖液中鹽離子濃度或者增加 pH 的連續洗脫或者梯度洗脫。
再生:在柱上先用1~2M、NaCl洗去柱上的雜蛋白,再用蒸餾水洗去柱中鹽。然后按預處理過程將葡聚糖凝膠C-25再處理一遍即可。
存儲:葡聚糖凝膠C-25干粉保存于4~25℃、干燥、通風、清潔處;溶脹后的凝膠保存于4~8℃ 20%乙醇溶液或0.01M、NaOH中。