方法分類

1.乙醇浸泡：在室溫下，將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時，并不斷攪拌以保證凝膠溶脹，用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干；

2.無鹽水浸泡：室溫下，在無鹽水中充分溶脹24小時，間隙攪拌，以保證凝膠的完全溶脹，然后；

3.鹽酸浸泡：在常溫下再用0.2NHCl浸泡12小時，間隙攪拌，濾干，水洗至中性；

4.將溶脹好的凝膠脫氣后（真空抽濾或超聲波）根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi)，注意保持濕態(tài)裝柱，并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層；

5.上樣前平衡層析柱至少3-5個柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止（流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值）；

6.凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積，我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積，視分離情況可以調(diào)整；脫鹽時上樣量可以達到20%的柱床體積，柱高的選擇也與分離要求相關(guān)，柱高控制在40-50cm以下，過高的凝膠層會引起較大的反壓，應(yīng)當(dāng)盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制，脫鹽時高徑比為5：1即可；

7.洗脫方法：可以用無鹽水，也可以采用上柱時的緩沖液洗脫；在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以完全分離純化；

8.在位清洗（CIP）凝膠使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗四個柱體積，再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。

儲運特性

1、未使用，室溫保存即可。

2、使用后保存方法如下：凝膠層析的載體不會與被分離的物質(zhì)發(fā)生任何作用，因此凝膠柱在層析分離后稍加平衡即可進行下一次的分離操作。但使用多次后，由于床體積變小，流動速率降低或雜質(zhì)污染等原因，使分離效果受到影響。此時對凝膠柱需進行再生處理，其方法是:先用水反復(fù)進行逆向沖洗，再用緩沖溶液平衡，即可進行下一次分離。對使用過的凝膠，若短時間保存，只要反復(fù)洗滌除去蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，加入適量防腐劑即可；

3、若長期保存，則需將凝膠從柱中取出，進行洗滌、脫水和干燥等處理后，裝瓶保存。