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DEAE-瓊脂糖凝膠FF操作步驟

2022-01-14 15:04 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
1.產品介紹
DEAE-瓊脂糖凝膠FF是一種將二乙胺基乙基鍵合在瓊脂糖微球上形成的帶有弱堿陰離子基團的層析分離介質。
該產品保留了瓊脂糖極好的親水性及大網架結構,與生物活性大分子有很好的相容性,具有離子交換容量高,、特異性吸附少和流速快等特點,廣泛用于蛋白質、核酸、多肽及多糖等生物大分子的實驗室規模制備以及生物制藥、生物工程的工業化制備。

2.規格
1ml(預裝柱)、5ml(預裝柱)、10ml(預裝柱)、20ml、100ml、500ml
3.產品性能
性能     指標
基質     6%瓊脂糖微球
離子交換類型     弱堿性陰離子基團
配體     -O-CH2CH2-N+(C2H5)2H
配體密度     100~180μmol/ml
載量     約110mg BSA/ml
粒徑     45~165μm
推薦流速/*流速     50~100/700 cm/h
耐反壓     0.3MPa
工作溫度     4~40℃
耐熱     PH7.0水中,120℃滅菌30min
pH穩定范圍:長時間/短時間     2~12/1~14
儲存緩沖液     20%乙醇
儲存溫度     4-8℃

4.使用方法
①平衡
用2~5個柱體積的初始緩沖溶液進行平衡,建議流速為100 cm/h。
觀察檢測器的變化,直到電導率、pH值等參數不變。
②上樣
樣品的預處理:樣品需用0.45μm濾膜過濾,在上樣,以免堵塞層析柱。
上樣量根據樣品的性質和層析介質的量進行選擇,也可通過線性實驗找到*上樣量。
③淋洗
用2~3個柱體積的平衡緩沖液進行淋洗,觀察檢測器的變化,直到電導率、pH值等參數基本不變。
④洗脫
可用恒定洗脫、梯度洗脫或者階躍洗脫。
一般推薦使用增大鹽濃度的梯度洗脫。

5.再生、清洗、保存
①凝膠再生
(1)用高鹽濃度的緩沖液(含1~2 M NaCl)按操作流速沖洗3~5個柱體積,接著用平衡液洗到平衡3~5個柱體積。
(2)再生時若有失活蛋白質或脂類物質洗不掉,可用在位清洗法除去。
②在位清洗
(1)去除強結合的蛋白質或脂類物質:1 M NaOH洗2個柱體積,8 M尿素洗2個柱體積, 30%異丙醇洗2個柱體積,平衡緩沖液洗2個柱體積。
(2)去除內毒素熱原:1 M NaOH清洗1~2 h,速度50 cm/h,再用無熱原的1M NaCl溶液置換(OH-置換為Cl-)。
(3)在位清洗可有效去除介質上的雜質,反向清洗效果更佳

6.注意事項:
1)使用時保證柱子和緩沖液的溫度一致,避免柱床內產生氣泡,影響純化效果。
2)在常用水相緩沖液、1M NaOH、8M尿素、6M鹽酸胍、70%乙醇中穩定
3)本產品保存條件為20%乙醇,4~8℃。
4)2-25℃,常壓,避光運輸
5)僅供科研實驗使用
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