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辛基-瓊脂糖凝膠CL-4B使用注意事項

2022-02-16 15:44 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑

中文名稱:辛基-瓊脂糖凝膠CL-4B
性狀:白色微球,凝膠狀,保存在20%酒精溶液中
凝膠類型:疏水層析填料
結構成分:4%交聯瓊脂糖
粒徑:45-165μm
工作PH值:2-14(短時間);3-12(長時間)
操作溫度:4-40℃
配基密度:35μmol/mL
操作溫度:室溫
貯存:產品應密封貯存在 4℃~25℃(保存溶液為 20%乙醇),通風、干燥、清潔的地方,不能冷凍。用過的柱子貯存在 4℃(20%乙醇)。

應用:
本產品具有高化學穩定性、高流速、高載量、好的機械性能、可在位清洗、多次重復使用等特點,非特異性吸附低,回收率高,適用于工業規模生產,適用于在 pH 工作范圍內可形成正離子的生物大分子的分離純化,廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質、核酸及多肽的離子交換制備。

辛基-瓊脂糖凝膠 CL-4B 是將辛基鍵合在瓊脂糖凝膠 CL-4B 上形成的一種可利用疏水相互作用來實現目標產品純化分離的疏水類介質。

使用方法:
1.裝柱
① 將所有的試劑和填料達到室溫.配制初始緩沖液(平衡液)和緩沖液。
② 根據柱子大小取所需凝膠的量,清洗掉20%乙醇,抽干,用初始緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1比例)配成勻漿。
③ 將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液體(液面略高于濾膜),務必使底端無氣泡。
④ 用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內,注意不要使用氣泡。打開柱子出液口,使凝膠在柱內自由沉降,連結好柱子頂端柱頭。
⑤ 打開蠕動泵,讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過,使柱床穩定。用2-3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。

2.平衡
讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子,到流出液電導和pH不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液,如:0.02~0.05mol/L的PBS加1~2.5mol/L(NH4)2SO4等。

3.上樣
① 樣品用平衡液配制,渾濁的樣品要離心、過濾后上柱;
② 一般情況是讓目標產品結合在柱子上,用平衡洗液洗去雜質,再選擇一種洗脫液洗下目標產品。
③ 介質對樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質、流動相的離子強度和溫度。溫度越大、鹽濃度越高或樣品組分疏水性越強,介質對組分吸附越牢。

4.洗脫
疏水介質可用減小鹽濃度進行洗脫。加表面活性劑或者有機溶劑可加強洗脫。最常用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液,如:0.02~0.05mol/L的PBS。

5.再生
一般用低鹽濃度的緩沖液洗,洗10倍以上柱體積,接著用結合蛋白的平衡液洗到平衡,可再次使用。若有失活的蛋白或者脂類物質在再生時洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。

6.在位清洗
① 對于以離子鍵結合上去的蛋白,可以用2M NaCl去除。
② 對沉淀蛋白、以疏水作用結合的蛋白或者脂類物質,可用1M  NaOH去除。
③ 對強疏水性結合的蛋白、脂類等,可用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗,但要注意有機溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加,否則容易產生氣泡。清洗完畢后,用至少3倍柱體積緩沖液平衡柱子。

7.去熱源
用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時或者用0.1M的氫氧化鈉24小時。或用以下步驟去除:
① 2倍柱體積的70%的乙醇;
(2)2倍柱體積50mM Tris-HCl pH7.5
③ 1倍柱體積4M尿素
④ 3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1M NaCl;
以上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制。

8.消毒
用0.5~1.0M NaOH室溫下洗8~10倍柱體積,初始緩沖液平衡柱子。

注意事項:
1.密封貯存于4~28℃(保存溶液為20%乙醇+0.1M醋酸鈉),通風、干燥的地方,不能冷凍。用過的柱子貯存于4℃(20%乙醇)。
2.在裝柱、使用和保存柱子的時候,要避免柱子流干,氣泡進入。

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