中文名稱：支原體肉湯培養(yǎng)基
供應商：遠慕生物
用途：支原體肉湯培養(yǎng)基用于生物制品無菌試驗支原體檢測。
成分g/L：豬胃消化液：500mL；牛肉浸液(1:2)：500mL；酵母浸粉：5.0；氯化鈉：2.5；葡萄糖：5.0；酚紅：0.02，最終pH7.6±0.2。
用法：取本品21g，加1L蒸餾水，加熱溶解，分裝，121℃高壓滅菌15min。用前加入20%小牛血清及抑菌劑。

支原體（mycoplasma）是一類沒有細胞壁、高度多形性、能通過濾菌器、可用人工培養(yǎng)基培養(yǎng)增殖的最小原核細胞型微生物，大小為0.1～0.3微米。由于能形成絲狀與分枝形狀，故稱為支原體。支原體廣泛存在于人和動物體內，大多不致病，對人致病的支原體主要有肺炎支原體、溶脲脲原體、人型支原體、生殖器支原體等。巨噬細胞、lgG及IgM對支原體均有一定的殺傷作用。

支原體革蘭染色為陰性，但不易著色，一般用Giemsa染色，染成淡紫色。支原體主要以二分裂方式繁殖，亦可以出芽方式繁殖，分枝形成絲狀后斷裂呈球桿狀顆粒。大部分支原體繁殖速度比細菌慢，適宜生長溫度為35℃，最適pH值為7.8～8.0。在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，形成典型的“荷包蛋”狀菌落。支原體抵抗力較弱，對熱、干燥敏感，對75%乙醇、煤酚皂溶液敏感，對紅霉素、四環(huán)素、螺旋霉素、鏈霉素、卡那霉素等藥物敏感，但對青霉素類的抗生素不敏感。

應用：用于牛支原體PCR檢測方法的建立及臨床應用研究

牛支原體（Mycoplasma bovis）主要引起牛的肺炎、關節(jié)炎、乳房炎、角膜炎、結膜炎等。

采集病牛的肺臟、肝、胸腔滲出物等,接種支原體肉湯培養(yǎng)基,同時剪碎病料呈小塊狀或直接接取胸腔滲出液,在20%馬血清瓊脂培養(yǎng)基上劃線接種,置5%CO2、37℃溫箱中培養(yǎng),5～7d觀察判定。

肉湯培養(yǎng)基中生長初期呈輕微渾濁或呈白色點狀、絲狀生長,以后逐漸均勻渾濁,半透明稍帶乳光,不產(chǎn)生菌膜或沉淀,也無顆粒懸浮。

在20%馬血清瓊脂培養(yǎng)基上生長遲緩,為極小的水滴狀圓形略帶灰色的微細菌落,中央有乳頭狀突起。姬姆薩染色,顯微鏡觀察,菌落為多形態(tài),以球點狀最常見,大小在125～250 nm。對病牛肺部實變組織進行DNA模板的提取,并分別以牛支原體、無乳支原體、絲狀支原體等為陽性對照,利用支原體通用引物擴增其16SrRNA,建立了擴增16S rRNA序列進行支原體檢測的方法,擴增到16S rRNA的基因片段,大小為1.5kb左右,經(jīng)過測序,并與GenBank公布的支原體16S rRNA基因序列進行比較,分別與幾種支原體陽性樣本的序列同源性均在97100%。

支原體的培養(yǎng)困難,生長周期長,營養(yǎng)條件苛刻,使其不能作為早期、快速的檢測方法。PCR技術為DNA體外擴增技術,呈2n放大效應,可檢測樣品中微量級的DNA,具有高靈敏性,因此適于早期檢測。

對導致牛支原體病的絲狀支原體絲狀亞種、牛支原體、無乳支原體和綿羊肺炎支原體設計了4對特異引物,建立了多重PCR方法,以期達到快速檢測的目的,試驗具有特異性強,敏感性高的特點,為臨床檢測提供了強有力的技術支持,為臨床疑似支原體感染病例的鑒別診斷提供較有效的快速診斷方法。