實驗過程
進行測試時,作為對照品的蔗糖標準品和相應(yīng)的空白必須根據(jù)試劑盒制造商的要求在標準1cm石英比色皿中制備,此次實驗使用的是上海遠慕生物蔗糖試劑盒,如下表所示。
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比色皿 |
蔗糖分析試劑[mL] |
樣品量[mL] |
水[mL] |
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蔗糖分析試劑空白 |
0.1 |
- |
0.1 |
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葡萄糖分析試劑空白 |
- |
- |
0.2 |
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對照品空白 |
- |
0.1 |
0.1 |
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對照品測試 |
0.1 |
0.1 |
- |
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樣品空白 |
- |
0.1 |
0.1 |
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樣品測試 |
0.1 |
0.1 |
- |
將每個比色皿中物質(zhì)混合均勻并在室溫靜置10分鐘。然后將2.0 mL葡萄糖分析試劑加入到每個比色皿中,混合均勻并在室溫再靜置15分鐘。
如果儀器配備了自動多聯(lián)池,可以一次加載所有的空白、對照品和樣品,使得測量流程變得更便利。
通過下面公式計算得到蔗糖濃度。首先計算總空白,它包括了樣品和試劑的吸光度:
A(總空白)=A(樣品/對照品空白)+A(蔗糖分析試劑空白)-A(葡萄糖分析試劑空白)
對于樣品和對照品,因生成NADH產(chǎn)生的吸光度差值可如下計算:
ΔA=A樣品/對照品測試-A總空白
現(xiàn)在就可以計算得到蔗糖濃度了:
(ε:蔗糖的吸光系數(shù),d:光程)
總結(jié):蔗糖含量可以很容易的使用酶試劑盒和紫外可見分光光度計進行測量。酶分析強大之處在于高專一性和靈敏性,可以分辨蔗糖和其它糖分子如葡萄糖和果糖。酶分析可以廣泛用于飲料和其它食品。