1.雙抗體夾心法：

屬于非競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，檢測(cè)抗原最常用的方法，檢測(cè)含有至少兩個(gè)抗原決定簇的多價(jià)抗原。原理是先將特異性抗體與固相載體連接；加入待測(cè)標(biāo)本，形成固相抗原抗體復(fù)合物；再加入酶標(biāo)抗體形成雙抗體夾心，洗滌；加底物顯色，根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量檢測(cè)。

如血清標(biāo)本中有類(lèi)風(fēng)濕因子（RF） 存在，則可出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)，因?yàn)镽F是一種抗變性IgG的自身抗體，它能與多種動(dòng)物的變性IgG的Fc部分結(jié)合，因此RF就可作為固相抗體和酶標(biāo)抗體之間的橋接抗原。

雙抗體夾心法只適用于二價(jià)或以上的較大分子抗原的測(cè)定，不能用于小分子半抗原的檢測(cè)。

2.雙位點(diǎn)一步法：

針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同且空間距離較遠(yuǎn)的決定簇，包被使用一種單抗，酶標(biāo)記使用另一種單抗。測(cè)定時(shí)將待測(cè)抗原和酶標(biāo)抗體同時(shí)加入，溫育、洗滌，加入底物顯色。若待測(cè)抗原濃度過(guò)高時(shí)，過(guò)量的抗原可分別同固相抗體和酶標(biāo)抗體結(jié)合而抑制夾心復(fù)合物的形成，出現(xiàn)鉤狀效應(yīng) ，顯色降低，甚至假陰性。必要時(shí)可將標(biāo)本經(jīng)過(guò)適當(dāng)稀釋后重復(fù)測(cè)定。

3.競(jìng)爭(zhēng)法：

用于測(cè)定小分子抗原，如藥物、激素 等。原理為先用抗小分子的特異性抗體包被固相，然后同時(shí)加入待測(cè)樣本和酶標(biāo)記的小分子 ，兩種小分子競(jìng)爭(zhēng)與固相上的抗小分子的特異性抗體結(jié)合，溫育一定時(shí)間后洗滌，加入酶底物顯色。

特點(diǎn)是：

①酶標(biāo)記抗原與樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的非標(biāo)記抗原具有相同的與固相抗體結(jié)合的能力；

②反應(yīng)體系中，固相抗體和酶標(biāo)抗原是固定限量 ，且前者的結(jié)合位點(diǎn)少于酶標(biāo)記和非標(biāo)記抗原的分子數(shù)量和；

③免疫反應(yīng)后，結(jié)合于固相載體上復(fù)合物中被測(cè)定的酶標(biāo)抗原的量(酶活性)與樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中非標(biāo)記抗原的濃度成反比。