DNA合成阻斷法：選用DNA合成抑制劑，可逆地抑制DNA合成，而不影響其他時期細胞的運轉，最終可將細胞群阻斷在S期或G1/S交界處。羥基脲、阿糖胞苷、氨甲蝶呤、高濃度AdR(脫氧腺苷)、GdR(脫氧鳥苷)和TdR，均可抑制DNA合成，使細胞同步化。 其中高濃度TdR對S期細胞的毒性較小，因此常用TdR雙阻斷法誘導細胞同步化：在細胞處于對數生長期的培養基中加入過量TdR-（Hela細胞系，2mol/L；CHO細胞系，7.5mol/L），S期細胞被抑制，其他細胞繼續運轉，最后停在G1/S交界處，棄去TdR，洗滌細胞并加入新鮮培養液，細胞又開始分裂。當釋放時間大于Ts時，所有細胞均脫離S期，再次加入過量TdR，細胞繼續運轉至G1/S交界處，被過量TdR抑制而停止。

該方法的優點是同步化程度高，適用于任何培養體系，可將兒乎所有的細胞同步化。

缺點是產生非均衡生長現象，個別細胞體積增大。