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溶菌酶的溶菌作用機制

2022-09-22 13:24 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
溶菌酶(lysozyme)又稱胞壁質酶(muramidase)是一種能水解致病菌中黏多糖的堿性酶。主要通過破壞細胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之間的β-1,4糖苷鍵,使細胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽,導致細胞壁破裂內容物逸出而使細菌溶解。溶菌酶還可與帶負電荷的病毒蛋白直接結合,與DNA、RNA、脫輔基蛋白形成復鹽,使病毒失活。因此,該酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。
[基本原理]
溶菌酶的殺菌機理是其作用于細菌細胞壁的粘肽層,粘肽是細菌的細胞壁主要成分。溶菌酶能切斷粘肽結構中的 N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸之間的β- 1,4糖苷鍵,破壞粘肽支架,使細胞壁破壞。由于細菌細胞壁的重要功能之一是保護細菌,即抗低滲,故細菌失去細胞壁的保護作用后,在低滲環境中可發生溶解。溶菌酶的主要作用對象是革蘭氏陽性菌。革蘭氏陰性細菌細胞壁粘肽層外還有脂多糖、外膜和脂蛋白結構,故在一般情況下溶菌酶不易發揮直接做用。

[實驗材料]
溶壁微球菌( M.Lysodeikticus):本菌是由空氣中分離出的一種革蘭氏陽性菌,對人不致病,菌落黃色,普通瓊脂培養基生長良好,每月傳代一次或凍干保存,用于制備溶壁微球菌瓊脂平板。
標準溶菌酶:稱取溶菌酶標準純品,用 1/15mol.L -1 PBS配制為1000ug/ml原液,并稀釋為100、50、10 ug/ml標準液,用前保存在冰箱中;用于陽性對照及制備標準曲線。
唾液:用無菌平皿收集唾液,可在同學間收集。
其它:無菌打孔器(孔徑 2mm),無菌毛細吸管、米尺等。

[實驗方法]
用無菌打孔器在溶壁微球菌瓊脂平板上打孔,用針頭挑出孔內瓊脂,孔徑 2mm左右,孔距5-20mm。
用毛細吸管取新鮮收集的唾液加入瓊脂孔內,每孔加一滴,每滴約有 0.025ml,同時加標準溶菌酶作陽性對照。
置 24-28 C°下12-18h觀察結果。

[實驗結果]
用小米尺或三角板量取小孔周圍溶菌環直徑,并作記錄,可與標準溶菌酶陽性對照作對比觀察。
如需定量測定檢品(唾液)中的溶菌酶含量,可將上述各種稀釋度的溶菌酶標準溶液,分別加入小孔中,同法測定溶菌環直徑,用半對數紙制成標準曲線,檢品中的溶菌酶含量可從標準曲線上查出。
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