瓊脂糖凝膠電泳是利用DNA、RNA分子帶負電荷磷酸基團的特性，通過電流使得片段大小不同的核酸由負極的凝膠孔中緩慢向正極移動，最終達到分離核酸分子的技術。由于分子量小的核酸片段在凝膠中移動速度較快，分子量大的核酸片段移動相對較慢的特點，就可以將分子量不同的核酸片段區分開，再結合DNA Marker，即DNA分子量固定已知的標準品進行分析，就可以準確識別和判斷核酸片段大小，也就是跑出來的“小東西”到底是不是我們想要的目的基因。 瓊脂糖凝膠電泳技術目前在生物學科中有非常廣泛的應用，但是在這個過程中有幾點小細節還需要我們多多注意哦：

①瓊脂糖凝膠制備。在制備之前，我們首先要確定瓊脂糖凝膠濃度，當我們需要跑小片段核酸時，就需要制備濃度較高的瓊脂糖凝膠，這樣DNA片段跑起來的阻力變大，速度變慢，反之亦然。通常情況下，瓊脂糖凝膠的濃度在1%左右，即1克瓊脂糖與100毫升電泳緩沖液混勻制成，二者體積總和不要超過錐形瓶的三分之一。搖晃混勻后用微波爐加熱到微沸狀態，搖勻后繼續加熱至微沸狀態，再次搖勻，反復多次，直至溶液變的清澈明亮。避免溶液暴沸的情況出現，以免影響跑膠效果。冷水沖洗瓶壁略微降溫后添加適量核酸染料，搖勻倒入插入梳子的模具中，等待30-60 min凝膠完全凝固即可，盡量在3小時內使用完畢。

②樣品準備。樣品在從PCR儀中取出后不要急于點樣，因為樣品剛取出時管內液體和氣體溫度很高，非常活躍，馬上開蓋會造成擴增產物彌散到空氣中，造成實驗室氣溶膠污染。所以可以在-20℃冷卻5 min，或在4℃冷卻20 min再離心上樣。樣品上樣前需要加入上樣緩沖液，混勻后取適當的量（5-10微升）緩慢注入梳子孔中，由于上樣緩沖液的作用，我們可以清晰看見樣品注入的過程，與電泳過程中核酸移動的距離。

③電泳。凝膠帶孔的一側放入負極一側，因為核酸樣品由負極移動向正極，負極一般用黑色表示。電泳槽倒入與凝膠相同的電泳緩沖液，確保電泳槽液面可以沒過凝膠表面。必須注意點樣開始和完畢后盡量不要移動電泳槽，以免造成樣品擴散到電泳液中。點樣完畢后靜置2 min，如若樣品過多，需要加快點樣速度，避免先點的樣品擴散，影響條帶結果。上述工作完成后蓋嚴電泳槽蓋，打開電源，電壓設置120V左右，跑膠20-30 min即可。注意觀察凝膠上染料移動位置，進而減少或增加時間。

④結果判讀。取出凝膠放在切膠儀或凝膠成像分析儀上，用紫外燈照射觀察、拍照留存條帶結果。根據DNA Marker的條帶位置比照分析，得出目的條帶的位置（大小）、亮度（數量）和非特異性擴增（擴增效果）。

結合上面的介紹，你有沒有存在日常操作中對小細節的疏忽呢？瓊脂糖凝膠電泳從制備、上樣、電泳和結果判讀，每一步環環相扣，一點點問題都會體現在最終的結果上。在實驗中為了更好的實驗效果，遠慕生物推出瓊脂糖、TAE速溶粉末，核酸染料，上樣緩沖液等全套瓊脂糖凝膠電泳所需試劑，更有含染料的Taq酶預混液，不用再去加上樣緩沖液啦！擴增完成即可直接點樣，省時省力，避免污染！