1、DNA 的瓊脂糖凝膠電泳檢測

（1）配制瓊脂糖凝膠

①稱取適量瓊脂糖，放入100mL錐形瓶中按膠濃度加入1倍 TAE 或 TBE 緩沖液，于微波爐或水浴中溶解。

②熔化的瓊脂糖冷卻至60℃，加入終濃度為0.5μg/mL 的 EB，混勻。

③將凝膠床水平放置，插入兩端的擋板，用滴管吸取少量的凝膠封好膠床邊緣。

④放入梳子，使梳齒高于底板0.5～1.0mm。

⑤倒入瓊脂糖凝膠溶液，其厚度為3～5mm，放置30～60min，使膠完全硬化。

⑥去掉兩端的擋板，將膠床放入電泳槽中，加入電泳緩沖液，液面高出膠面1～2mm 小心拔出梳子，檢查樣品孔是否完整。

（2）點樣

①取濃度為 1μg/μL 的 DNA 樣品5μL，與 5μL 溴酚藍于封口膜上混合。

②用 20μL 的移液器將樣品加入樣品孔內。操作時，可用右手持移液器，左手握住右手腕，左肘支撐桌面，防止點樣時右手晃動。

③同樣操作點上 DNA 分子量標準物。

（3）電泳

將電泳槽置冰箱或冷室中，蓋上電泳槽蓋，接通電源，樣品端接負極（DNA 向陽極移動），以 5V/cm 電壓電泳。

（4）溴酚藍泳動至膠3/4距離時，可停止電泳，取出凝膠，置短波紫外線（254nm）下觀察。植物 DNA 樣品應呈現一條遷移率很小的整齊條帶，與分子量標準物的遷移率相比大致估計所提 DNA 的相對分子質量大小。

DNA 樣品純度植物總（核）DNA 樣品應呈現一條遷移率很小的整齊條帶，質粒 DNA 應呈現三條不同構型的條帶，這時表明所提樣品較純。如果在溴酚藍前有彌散的熒光區出現，則表明樣品中存有 RNA 雜質，若所提總 DNA 或核 DNA 在0.5％瓊脂糖凝膠上不能形成清晰的條帶，而只是彌散一片，則表明 DNA 已嚴重降解。若所提質粒 DNA 樣品在質粒條帶上端還有熒光條帶（遷移率小于質粒 DNA 條帶），表明質粒 DNA 樣品中有染色體DNA 污染。

DNA 分子大小與泳動距離相同的標準 DNA 條帶的相對分子質量相近。

DNA 樣品量比較被測 DNA 樣品條帶與標準 DNA 樣品條帶的熒光強度，DNA 量相同時所產生的熒光強度相同。如以 λ-DNA 為標準樣品，其濃度為1μg/μL，上樣量為 2μL，植物總 DNA 樣品條帶的亮度與之相近時，其電泳樣品量約為2g，根據上樣體積可大致估計出樣品 DNA 的濃度。對于 λ-DNA 限制性酶切片段的量可將總上樣量（xμg）除以總 bp數（約50000bp）再乘上該條帶的bp數。

（說明：①配制多大濃度的瓊脂糖凝膠，要根據被檢的 DNA 分子大小來確定。檢測植物總 DNA、核 DNA 時，使用0.5％的凝膠；檢測大腸桿菌質粒 DNA 時，使用0.8％～1.0％的凝膠。

②制備0.5％以下低濃度凝膠時，可先于膠床上制1％的支持膠，待其固化后將低濃度的膠制于其上，以增加凝固強度；

③若所提總 DNA 或核 DNA 在0.5％瓊脂糖凝膠上不能形成清晰的條帶，而只是彌散一片，則表明 DNA 已嚴重降解；

④需要快速檢測所提的 DNA 樣品時，可采用微型瓊脂糖凝膠電泳，配制1％的瓊脂糖凝膠10mL，倒在小玻璃板或幻燈片上，自然鋪開。梳子用 1mm 厚的有機玻璃制作，齒寬3mm，齒長5mm，齒間距為21nm。點樣量為2～5μL，6～7V/cm電壓電泳1h檢測。

⑤以 λ-DNA 限制性酶切片段為標準樣品。

2、RNA 的變性瓊脂糖凝膠檢測

（1）試劑

①MOPS 緩沖液（10倍）：0.4mol/L嗎啉代丙烷磺酸（MOPS）（pH7.0），0.1mol/L NaAc，10mol/L EDTA。

②上樣染料：50％甘油，1mmol/L EDTA，0.4％溴酚藍，0.4％二甲苯藍。

③甲醛。

④甲酰胺（去離子）。

（2）操作

①將制膠用具用70％乙醇沖洗一遍，晾干備用。

②配制瓊脂糖凝膠

a.稱取 0.5g 瓊脂糖，置于干凈的 100mL 錐形瓶中，加入 40mL 蒸餾水，微波爐內加熱使瓊脂糖徹底溶化均勻。

b.待膠涼至60～70℃，依次向其中加入9mL甲醛、5mL MOPS 緩沖液（10倍）和 0.5μL 溴化乙錠，混合均勻。

c.灌制瓊脂糖凝膠。

③樣品準備

a.取 DEPC 處理過的 500μL 離心管，依次加入如下試劑：MOPS 緩沖液（10倍）2μL，甲醛3.5μL，甲酰胺（去離子）10μL，RNA 樣品4.5μL，混勻。

b.將離心管置于60℃水浴中保溫10min，再置冰上2min。

c.向管中加入 3μL 上樣染料，混勻。

④上樣（注意點上 RNA 分子量標準物）。

⑤電泳：電泳槽內加入1倍 MOPS 緩沖液，于 7.5V/mL 的電壓下電泳。

⑥電泳結束后，在紫外燈下檢查結果。

RNA 樣品質量不管是變性凝放電泳還是非變性凝膠電泳，完整的總 RNA 樣品應呈現出三條條帶，為 28SrRNA，18SrRNA，5 SrRNA。其中 8SrRNA 條帶的亮度應約為18SrRNA 8條帶亮度的兩倍，表明 RNA 樣品比較完整，無多少降解。如果兩條帶的亮度反過來了，說明 28SrRNA 已降解成 18S 大小。如無清晰條帶，表明樣品已嚴重降解。如果在點樣槽內或槽附近有熒光區帶，則表明 RNA 樣品中有 DNA 污染。

（3）說明

①RNA 電泳可以在變性及非變性兩種條件下進行。非變性電泳使用1.0％～1.4％的凝膠，不同的RNA 條帶也能分開，但無法判斷其分子量。只有在完全變性的條件下，RNA 的泳動率才與分子量的對數呈線性關系。因此要測定 RNA 分子量時，一定要用變性凝膠。在需快速檢測所提總 RNA 樣品完整性時，配制普通的1％瓊脂糖凝膠即可。

②植物總 RNA 中的 28SrRNA 及 18SrRNA 在變性凝膠上的遷移率相當于分子量 5.1kb 及2.0kbRNA 的遷移率。