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Flag標簽蛋白檢測抗體實驗應用說明

2022-12-14 11:29 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
Flag標簽蛋白檢測抗體

遠慕生物提供可用于WB,IF,IP應用的Flag抗體,特異性檢測Flag標簽融合蛋白,Flag標簽抗體可識別在細胞內表達的Flag標記重組蛋白,包括Flag位于氨基末端、中段以及羧基末端的重組蛋白。

Flag標簽系統利用一個短的親水性八氨基酸肽( DYKDDDDK)融合到目標蛋白。Flag標簽可位于蛋白質的C端或N端,該系統已廣泛應用于細菌、酵母和哺乳動物細胞等多種細胞類型,相應的Flag標簽抗體也被廣泛應用。由于Flag標簽系統的純化條件是非變性的,因此可以純化所有有活性的融合蛋白。Flag標簽可以通過加入腸激酶處理去除,腸激酶專一識別該肽序列C末端的5個氨基酸殘基。Flag抗體可以用于檢測和Flag標簽融合表達蛋白的表達、細胞內定位,以及純化、定性或定量檢測Flag融合表達蛋白等。

由于Flag標簽蛋白檢測抗體親水特性,Flag標簽往往位于融合蛋白的表面上,因此比較容易被抗體接近并識別。不同的Flag標簽抗體與Flag標簽 有不同的識別和結合特性。

Fig. 1. Flag標簽蛋白IP實驗,IP (1:200) - WB (1:5,000):未轉染的293細胞裂解液(lane A), 轉染了Flag標簽蛋白的293細胞轉染裂解液 (lane B), 使用小鼠IgG作為陰性對照免疫沉淀293細胞裂解液(lane C),使用Flag單克隆抗體(1B10)IP轉染后的293細胞裂解液(lane D), 293細胞裂解液 中僅加入Protein G Beads (lane E).

Fig. 2. 使用Flag標簽單克 隆抗體,通過免疫熒光實驗(1:2000),分析轉染的Flag 重組蛋白在293細胞中的定 位,二抗為IFKine? Red 驢抗 小鼠,藍色為DAPI染色的細 胞核。
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