1、菌種要求
菌種試驗用菌株的傳代次數不得超過5代(從菌種保藏中心獲得的干燥菌種為第0代)，并采用適宜的菌種保藏技術進行保存，以保證試驗菌株的生物學特性。
金黃色葡萄球菌(Staphylococcus  aureus)〔CMCC(B)26 003〕
銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)〔CMCC(B)10 104〕
大腸埃希菌(Escherichia coli)〔CMCC(B)44 102〕
白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F)98 001〕
生孢梭菌(Clostridium sporogenes)〔CMCC(B)64  941〕
乙型副傷寒沙門菌(Salmonella paratyphi B)〔CMCC(B)50 094〕

2、菌液制備
2.1金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養物置于TSA上或TSB中，30-35℃，培養18-24h。
2.2生孢梭菌的新鮮培養物置于FTM中，30-35℃，培養18-24h。
2.3白色念珠菌的新鮮培養物置于SDA上，20-25℃，培養2-3天。
2.4黑曲霉菌的新鮮培養物置于SDA上，20-25℃，培養5-7天，或直到活的豐富的孢子，用0.05%聚山梨酯的PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉將孢子洗脫，然后，吸出孢子懸液至無菌試管內，用0.05%聚山梨酯的PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉制成適宜濃度的菌懸液。
2.5菌液制備后若在室溫下放置，應在2小時內使用；若保存在2～8℃，可在24小時內使用。生孢梭菌孢子懸液可替代新鮮的菌懸液，孢子懸液可保存在2～8℃，在驗證過的貯存期內使用。

3、陰性對照
為確認試驗條件是否符合要求，應進行陰性對照試驗，陰性對照試驗應無菌生長。如陰性對照有菌生長，應進行偏差調查。