血紅素鐵原子為二價與O2、卟啉的4個N，與珠蛋白的組氨酸殘基（咪唑）結合，成為八面體的絡合物結構。它與游離的血紅蛋白不同，是低自旋（spin）物質，吸收光譜也類似細胞色素還原型。氧分壓和氧合血紅蛋白的生成百分率（%）的圖即結合曲線（解離曲線），由于血紅素間的相互作用的變構（alloste－ric）效應而呈S型。氧合血紅蛋白的酸性比血紅蛋白強，生成時放出H+，將此稱為庫效應。可以認為，它在肺中與氧結合并放出二氧化碳；在組織中在乳酸的生成與氧的游離的相互關系具有意義。 血紅蛋白測定

（一）檢測原理血液中血紅蛋白以各種形式存在，包括：氧合血紅蛋白、碳氧血紅蛋白、高鐵血紅蛋白（Hi）或其他衍生物。采用比色法測定，包括：氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）測定法、十二烷基硫酸鈉血紅蛋白（SDS）測定法、疊氮高鐵血紅蛋白（HiN3）法、堿羥血紅蛋白法、溴代十六烷基三甲胺（CTAB）血紅蛋白測定法等。

1.HiCN測定法原理：血液中除硫化血紅蛋白（SHb）外的各種Hb均可被高鐵氰化鉀氧化為高鐵血紅蛋白，再和CN一結合生成穩定的棕紅色復合物-氰化高鐵血紅蛋白，其在540nm處有一吸收峰，用分光光度計測定該處的吸光度，經換算即可得到每升血液中的血紅蛋白濃度，或通過制備的標準曲線查得血紅蛋白濃度。

2.SDS測定法原理:血液中除SHb外的各種Hb均可與低濃度SDS作用，生成SDS-Hb棕紅色化合物，其吸收曲線波峰在538nm，波谷在500nm，肩峰在560nm，用分光光度計測定波峰處吸光度，經換算可得到每升血液中的血紅蛋白濃度。

（二）方法學評價

1.HiCN法:1966年被ICSH推薦為參考方法。該法具有操作簡單、顯色快、結果穩定可靠、讀取吸光度后可直接定值等優點。其致命的弱點是氰化鉀（KCN）試劑有劇毒，使用管理不當可造成公害。

2.SDS測定法：該法具有操作簡單、呈色穩定、準確性和精確性符合要求、無公害等優點。但由于摩爾消光系數尚未最后確認，不能直接用吸光度計算Hb濃度，而且SDS試劑的質量差異較大會影響檢測結果。

3.HiN3測定法：該法優點與HiCN測定法相似，最大吸收峰在542nm，顯色快，結果穩定，試劑毒性僅為HiCN測定法的1／7，但仍存在公害問題。

4.堿羥血紅蛋白（AHD575）測定法：該法試劑簡單，呈色穩定，無公害，吸收峰在575nm，可用氯化血紅素作為標準品。但儀器多采用540nm左右濾光板，限制了此法使用。

5.CTAB血紅蛋白測定法該法試劑溶血性強又不破壞白細胞，適用于儀器上自動檢測Hb和白細胞。缺點是測定結果的準確度和精密度不佳。

6.多參數血細胞分析儀:優點是操作簡單、快速，同時可獲得多項紅細胞參數，血紅蛋白測定原理與手工法相似，儀器法測定精度（CV）約為l%。

（三）質量控制

1.樣本異常血漿蛋白質、高脂血癥、白細胞數超過30×109/L、脂滴等可產生濁度，干擾Hb測定。

2.采血部位：部位不同，結果不同，靜脈血比毛細血管血低10%～15%。

3.結果分析：測定值假性增高的原因是稀釋倍數不準、紅細胞溶解不當、血漿中脂質或蛋白質量增加。

4.HiCN參考液：是制備標準曲線、計算K值、校準儀器和其他測定方法的重要物質。