1、計算稱量

根據待檢樣品屬性計算出所需的不同培養基的體積，根據說明書進行準確稱量；電子天平需開機預熱30min后使用，稱量過程中手要穩，避免將培養基灑落在天平稱量盤中，若灑落，應立即停止稱量，使用潔凈布擦干粉末，重新調“0”后稱量。

2、溶化

對于可溶性淀粉,先用少量冷水調成糊狀,再放入沸水中；不易溶解的培養基，先加入少量純化水振搖溶解后，二次加水配制；需分裝的培養基，需完全溶解，含瓊脂的培養基需加熱融化，完全溶解后，分裝至不同容器中進行滅菌。

3、分裝

如果要制作斜面培養基，須將培養基分裝于試管中。如果要制作平板培養基或液體、半固體培養基，則須將培養基分裝于錐形瓶內。分裝時，一手捏松彈簧夾，使培養基流出，另一只手握住幾支試管或錐形瓶，依次接取培養基。分裝時，注意不要使培養基粘附管口或瓶口，以免引起雜菌污染。裝入試管的培養基量，視試管和錐形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培養基時，每只15×150毫米的試管，約裝3～4毫升（1/4～1/3試管高度），如制作深層培養基，每只20×220毫米的試管約裝12～15毫升。

4、加塞

分裝完畢后，需要用硅膠塞堵住管口或瓶口。主要目的是過濾空氣，避免污染。不要用脫脂棉，以免因脫脂棉吸水使棉塞無法使用。塞入管口或瓶口中的硅膠塞，應緊貼內壁不留縫隙，以防空氣中微生物沿褶皺侵入，塞好后，以手提塞，管、瓶不下落為合適；硅膠塞的2/3應在管內，上端露出少許便于拔取。

5、包扎

塞好塞的試管和錐形瓶應蓋上牛皮紙用繩扎緊，同時貼上標簽，注明培養基的名稱、組別、配制日期后，準備滅菌。

6、滅菌

根據培養基說明書規定的滅菌參數進行滅菌。滅菌后，如制作斜面培養基和平板培養基，須趁培養基未凝固時進行。