（1）電解質：抗原和抗體通常為蛋白質分子，等電點分別為pH 3～5和pH 5～6，在中性或:弱堿性的環境中，表面均帶負電荷，適當濃度的電解質會使他們失去一部分負電荷而相互結合，出現肉眼可見的凝集或沉淀現象：在抗原抗體反應中，常用0.85%的NaCI溶液或各種緩沖液作為抗原、抗體的稀釋液，以提供適當濃度的電解質。

（2）溫度：抗原抗體反應必須在適宜的溫度中進行，一般為15～40℃，通常最適為37℃。一定范圍內，溫度升高，可促進抗原抗體分子問的碰撞機會，加速抗原抗體復合物的形成，加快可見反應的速度，若溫度高于56℃，可導致已結合的抗原抗體再解離，甚至變性或破壞；溫度越低，結合速度越慢，但結合牢固，易于觀察。某些特殊的抗原抗體反應，對反應溫度有特殊要求，如冷凝集素在4℃左右與紅細胞結合最好，20℃以上反而解離。

（3）酸堿度：抗原抗體反應必須在合適的酸堿度環境中進行，pH過高或過低都將影響抗原:抗體的理化性質，抗原抗體反應的最適酸堿度為pH 6～8。此外，當pH達到或接近顆粒性抗原的等電點時，即使沒有相應抗體存在時，也會引起抗原非特異性凝集，即自凝，造成假陽性反應，嚴重影響試驗的可靠性 。